168674. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-melanotropin, továbbá dibrómozott, illetve triciált származéka előállítására
7 168674 8 98%-os hidrazinhidrátot adunk hozzá és az elegyet 50 C°-on 4 órán át állni hagyjuk. A kivált anyagot szűrjük, hideg metanollal mossuk és exszikkátorban tömény kénsav felett megszárítjuk. A száraz anyagot vízzel ismét eldörzsöljük, leszűrjük és vízből átkristályosítjuk. Ily módon a fenti acetil-tetrapeptid hidrazidjához (Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-N2 H 3 ) jutunk. Ez a példa címében megjelölt termék a találmány szerinti eljárás kiindulóvegyülete. Termelés: 1,12 g (72,8%), op.: 247—250 C°. Rf =0,58 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30:20:6:11 arányú elegyében), Rf =0,20 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60:20:6:11 arányú elegyében). Elemzés a C22 H 32 0 8 N 6 B 2 S (700,4) képlet alapján: N Br számított: 12,00%, 22,82%; talált: 12,1%, 22,5%. 2. példa (Terc-butiloxikarbonil)-glutamil-hisztidil-fenilalanil-triptofil-glitil-(terc-butiloxikarboniI)-lizil-prolil-valinamid-monoacetát 5 6 7 8 9 10 11 12 13 [H-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys(BOC)-Pro-Val-NH2.CH 3 COOH] 84 mg (0,08 millimól) a Helv. Chim. Acta 46 1975 (1963)] szerinti előállított Z-GIu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH.HCI képletű, a glutamin-csoporton védett Na-benziloxikarbonil-hexapeptid-hidrokloridot 0,3 ml dimetilformamidban oldunk, a Helv. Chim. Acta 46 870 (1963) szerinti módon készült tripeptidamidból H-Lys(BOC)-Pro-Val-NH2.CH 3 C 6 S0 2 OH képletű tozilátot készítünk, s ebből 69 mg-ot, 16 mg 1-hidroxi-benztriazolt, 24 mg diciklohexilkarbodiimidet és 0,016 ml trietilamint adunk az előbbi hexapeptid-dimetilformamidos oldathoz, majd az elegyet még 0,3 ml dimetilformamiddal hígítjuk. 12 órai szobahőmérsékleten való állás után az oldószert lepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük, szűrjük és megszárítjuk. Termelés: 184 mg nyerstermék. Tisztításra szilikagéloszlopon etilacetát-piridin-jégecet-víz 60: 20: 6: 11 arányú elegyével eluálva frakcionáljuk, a főterméket tartalmazó frakciókat összegyűjtve bepároljuk, a maradékot éterrel eldörzsöljük és megszárítjuk. Ily módon az Na -benziloxikarbonil-(terc-butiloxikarbonil)-glutamil-hisztidiI-feniIaIanil-arginil-triptofiI-glicil-(terc-butiloxikarbonil)-lizil-prolil-valinamidot kapunk. Összegképlete: C72 H 101 N 17 O 15 (1444,8). Termelés: 75 mg (65%), Rf = 0,4 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60: 20: 6: 11 arányú elegyében). Az így kapott nonapeptidből 500 mg (0,345 millmiól) mennyiséget 16 ml metanol és 4 ml jégecet elegyében oldunk és 100 mg 10% palládiumot tartalmazó csontszén katalizátor jelenlétében 2 órán át hidrogénezzük. A katalizátor kiszűrése után az oldatot bepároljuk, a maradékot kevés vízben oldjuk és Iiofilizáljuk. A fenti módon eljárva a példa címében megadott, 5 helyen levő glutamin-, és a 11 helyen levő lizin-csoportján védett nonapeptid-acetátot állítjuk elő. Összegképlet: C64 H 95 N 17 0 13 CH 3 COOH (1370,4). Termelés: 450 mg (97%), Rf =0,15 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 60:20:6:11 arányú elegyében). 3. példa Dibróm-a-melanotropin 123456789 10. 11 12 13 5 (Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-Glu-His-Phe-Arg-Trp-Gly-Lys-Pro-Val-NH2) előállítása. Az 1. példa szerint előállított 700 mg (1 millimól) acetil-tetrapeptid-hidrazidot 5 ml dimetilformamidban oldunk, —5 C°-ra lehűtjük és 0,5 ml (3 millimól) le-10 hűtött 6 n sósavat, majd ugyanezen a hőmérsékleten keverés közben 76 mg (1,1 millimól) nátriumnitrit tömény vizes oldatát adjuk hozzá. 10 perc keverés után 947 mg (1 millimól) H-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH.CH3 COOH képletű (benziloxikarbonil)-glu-15 tamil-hisztidil-fenilalanil-arginil-triptofil-glicin-mono -acetátot [előállítása: Ann. Univ. Bp. Sect. Chim. 13 25 (1972)] adunk hozzá 4 ml dimetilformamidban oldva, amely még 0,41 ml (3 millimól) trietilamint is tartalmaz. Az elegyet két óra hosszat 0 C°-on keverjük, majd éj-20 szakán át jégszekrényben állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot egymás után 80 ml éterrel, 80 ml etilacetáttal, majd 60 ml acetonnal dörzsöljük el. Termelés: 1,58 (~100%) fehér amorf por, ami az Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-OH képletű de-25 kapeptid. Rf=0,50 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30:20:6: 11 arányú elegyében), op.: 208—219 C (50%-os tercier butanolból átkristályosítva, boml.). 30 Elemzés a C65 H 89 0 17 N 16 Br 2 S (1555,4) képlet alapján: N Br számított: 14,41%, 10,28%; talált: 14,2%, 10,1%. 35 Az előbbi dekapeptidből 807 mg (0,52 millimól) menynyiséget 62 mg (0,52 millimól) piridinhidroklorid hozzáadásával 15 ml dimetilformamidban oldunk, majd az oldathoz 638 mg (1,04 millimól) H-Lys(BOC)-Pro-VaI-40 -NH2 .CH 3 C 6 H 4 S0 2 OH képletű tripeptidamid-toluolszulfonátot (előállítását 1. a 2. példában), 0,145 ml (1,04 millimól) trietilamint, 275 mg (1,04 millimól) pentaklórfenolt és 214 mg (1,04 millimól) diciklohexilkarbodiimidet adunk. A reakcióelegyet 48 órán át szo-45 bahőmérsékleten keverjük, szárazra bepároljuk, majd éterrel és etilacetáttal elporítjuk, szűrjük, szárítjuk és vízzel kimossuk. Termelés: 1,2 g, diciklohexilkarbamidot tartalmazó, Ac-Ser-Dbt-Ser-Met-Glu(OtBu)-His-Phe-Arg-Trp-Gly-50 -Lys(BOC)-Pro-Val-NH2 képletű nyerstermék. Rf=0,60 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30:20:6:11 arányú elegyében). 800 mg, az előbbiek szerint készült nyers védett tridekapeptidamidot 15 ml 90%-os trifluorecetsavban ol-55 dunk, amely 1 csepp merkaptoetanolt is tartalmaz, és szobahőmérsékleten 20 percen át állni hagyjuk. Bepárlás után a maradékot 15 ml vízben oldjuk, az oldhatatlan mellékterméktől szűréssel elválasztjuk és a szűrletet acetátciklusban levő IRA—400 ioncserélő gyantából 60 készült oszlopon engedjük át. Az oldat liofilizálásakor 408 mg terméket kapunk. Rf =0,15 (etilacetát-piridin-jégecet-víz 30:20:6:11 arányú elegyében), s néhány magasabb Rf -értékkel vándorló szennyezést is tartalmaz. 65 Tisztításra karboximetil-cellulózt tartalmazó oszlo-4
