168542. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triszubsztituált imidazolok előállítására
5 168542 6 Az I általános képletű vegyületek sóit egyéb ismert eljárással is elkészíthetjük, feltéve, hogy az előállított származékok nem toxikusak és a szervezetben Fiziológiailag ártalmatlanok. A találmány szerinti vegyületek farmakológiai 5 hatását az alábbi módszerrel ellenőrizzük. Xantin oxidáz inhibitációjának vizsgálata. A találmány szerinti szubsztituált imidazol vegyületek inhibitációs hatását tejből nyert xantinoxidáz alkalmazásával ellenőrizzük. A vizsgálathoz 10 ml-enként 5-10 egység enzimet tartalmazó szuszpenziót készítünk, az enzim 60%-os telített ammónium-szulfát formájában kerül felhasználásra. Egy egységnyi enzim percenként 1 mól xantint alakít át húgysawá. A napi vizsgálathoz mintegy 15 0,05 mól enzimet 3 ml pufferral hígítunk. Pufferként 0,05 mól-os 7,4 pH-jú trisz puffert alkalmazunk. A vizsgálandó imidazolt a puffer-oldatban vagy megfelelő oldószerben, célszerűen dimetilszulfoxidban oldjuk. Ugyanezt az oldószert alkalmazzuk 20 az oldat hígításához is. A puffert, hipoxantint és az oldószert egy spektrofotométer küvettájába helyezzük, a megmaradó oldatot rázogatjuk, hogy ily módon levegővel telítődjön. EztJcömtően a hígított enzim-oldatot a küvettához hozzáadjuk, majd feljegyezzük a 290nm-en mérhető abszorpció változást. (A vizsgálathoz célszerűen regisztráló spektrofotométert alkalmazunk.) A vizsgálathoz olyan mennyiségű enzim-oldatot készítünk, hogy a percenkénti abszorpció változás 0,1 érték körül legyen. Az imidazol mennyiségét úgy választjuk meg, hogy elegendő legyen ahhoz, hogy az enzim hatását 30-70%-ban inhibitálja. Az 50%-os inhibitációhoz szükséges imidazol mennyiségét (v0 /v! = 2) oly módon határozzuk meg, hogy a v0 /v, értékét I függvényében ábrázoljuk, v0 jelenti az enzim bomlás sebességét inhibitor nélkül, v, jelenti a bomlás sebességét inhibitorral, I jelenti az inhibitor koncentrációját. A vizsgált imidazol hatást az inhibitáció százalékában adjuk meg. A vizsgálati eredményeket az I táblázat tünteti fel. I. Táblázat Xantin oxidáz inhibitációja Vizsgálati szám I általános képletű imidazol vegyületek Moláris koncentráció Inhibitáció %-ban R Rí R2 1 p-tolil -COOH -COOH 2 x 10-6 69 2 O H II II f -^"S -COOH -COOH 2 x 10-6 76 3 CH3-C-N-I O COOH -COOH 2xl0"7 46 4 0-naftil N-X^"^ -COOH -COOH 2xl0-7 -60 5 CH3 ~0-^ > -COOH -COOH 2xl0"7 47 6 3-piridil -COOH -COOH 2xl0-6 66 7 3-piridil -CN -CN 2xl0'5 38 8 3-piridil O II -C-NH2 O II -C~NH2 2 x 10_s 8 9 4-piridil -COOH -COOH 2xl0_s 71 10 4-piridil -CN -CN • 2xl0-8 53 11 4-piridil O II -C-NH, O II -C-NH2 2xl0"s 14 12 4-piridil -CN II -C-NH2 2xl0~7 50
