168366. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vérammónia mennyiségi meghatározására és reagens a meghatározás elvágzéséhez
5 168366 6 próba elegy reagenselegy önmaga Szabadalmi igénypontok Reagenselegy, ml 1,5 1,5 Plazma, ml 0,5 — Víz, ml -0,5 Az anyagokat összekeverjük és 334 nm-nél megmérjük az Ej kiindulási extinkciót. Ezután mindkét elegyhez hozzáadunk 20—20 jul glutamátdehidrogenázt. Az extinkciócsökkenést a nyugalmi állapot 10| eléréséig (mintegy 5 percig) követjük, utána mérjük az E2 extinkciót. A próbaelegy és a reagenselegy adataiból kiszámítjuk az extinkciókülönbséget AE = korrigált extinkciókülönbséget: E, - E2 K =AE Tcorr J próba _AF reagens-önmaga használjuk fel a számításnál: ümólNH3 /l=AE, - í^4-1000 15 t20 kon 6,0 = AE kon 673 ( £ 334 NADPH esetén = 6,0 cm-2 ) //mól; a próba hígítása a meghatározóelegyben 4,04; l-re átszámítva). 2. példa Reagenskombináció egy meghatározáshoz: 1. A puffer-szubsztrát elegyet stabilizált vizes oldatban tartalmazó tartályban van: 0,15 mól 8,6-os pH-jú trietanolamin-hidroklorid, 20 mmól a-ketoglutarát, 1,5 mmólADP, 15 mmól nátrium-azid 2. 0,3 jumól szárított vagy liofflizált NADPH-t magában foglaló tartály 5jLtmólNaHC03 -tés 30 g albumint tartalmaz. 3. 900 U/ml glutamátdehidrogenáz glicerin/víz-elegyben oldva, amely 5 mmól 7-es pH-jú foszfátpuffert és 1 mmól ADP-t tartalmaz. 25 30 35 40 1. Eljárás vérammónia mennyiségi meghatározáglutamátdehidrogenázzal és a-ketoglutaráttal, redukált állapotban levő koenzim jelenlétében és a jelentkező extinkció-változás mérésével, azzal jellemezve, hogy koenzimként redukált formájú nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfátot alkalmazunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy adenozin-difoszfát jelenlétében dolgozunk. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 8,0 és 9,0 pH-érték közötti, előnyösen 8,6 pH-értékű pufferben dolgozunk. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy trisz-puffert vagy trietanolamin-puffert használunk. 5. Reagenskombináció az 1—4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás kivitelezéséhez, azzal jellemezve, hogy 1. i a-ketoglutarátot és adenozin-difoszfátot 8,0-9,0 pH-értékű pufferben oldva, 2. glutamátdehidrogenázt és 3. redukált formájú nikotinamid-adenin-dinukíeotid-foszfátot tartalmaz. 6. Az 5. igénypont szerinti reagenskombináció kiviteli alakja, azzal jellemezve, hogy 0,05-0,25 mól 8-9 pH-értékű trietanolamin-pufferből, 15-50 mmól a-ketoglutarátból 0,3-5 mmól adenozin-difoszfátból és adott esetben 2-30 mmól alkáli-azidból, 5—50 U glutamindehidrogenázból, 0,1-0,5 Mmól redukált formájú nikotinamid-adenin-dinukleotid-foszfátból 10-50 mg szériumalbuminból és adott esetben 1—5 //mól nátrium-hidrogén-karbonátból és 5—50 mg dextránból, vagy ezek többszöröséből áll. A kiadásért felelős: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76-2222 - Dabasi Nyomda, Budapest - Dabas Felelős vezető: Földes György igazgató
