168297. lajstromszámú szabadalom • Eljárás dihidroaunomicin előállítására

7 168297 8 3. példa Az 1. példa szerint tenyésztő táptalajt állítunk elő, és azt 300 ml-es lombikokba osztjuk szét. A sterilizált lombikok tartalmát beoltjuk Corynebacterium simplex ATCC 6946 tenyészetével, és percenként 220 fordulattal keverve, 30°-on, 24-48 óra hosszat inkubáljuk. Ezután mindegyik tenyésztő lombikba daunorubicint adunk a következő alakokban: a) lombikonként a tiszta daunorubicin 10 mg/ml koncentrációjú 1 vagy 2,5 ml vizes oldatát (0,2 vagy 0,5 g/liter), b) lombikonként 47% 13057 RP antibiotikumot tartalmazó daunorubicin nyers termék 10 mg/ml koncentrációjú 1 vagy 2,5 ml vizes oldatát (0,095 g/lit vagy 0,24 g/liter daunorubicin). Ezután a lombikokat az 1. példa szerinti körülmények között legalább 24 óra hosszat inkubáljuk, és a továbbiakban az 1. példa szerint kezeljük. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaljuk össze. Kapott 20798 RP antibiotikum % Redukáló közeg Hozzáadott daunorubicin, g/liter Tiszta termék Nyers termék 0,2 0,5 0,095 0,24 teljes 24 órás 73 42 87 60 tenyészet teljes 30 órás 74 53 78 64 tenyészet teljes 48 órás 90 70 89 58 tenyészet 4. példa Az 1. példában leírt körülmények között Corynebacterium simplex ATCC 6946 tenyészetet készítünk. A kapott 24 órás vagy 30 órás tenyészetekkel redukáljuk a daunorubicint termelő Streptomyces coeruleorubidus NRRL 3045 törzs tenyészetének oxálsavas szüredékében levő daunorubicint. Az oxálsav eltávolítására ehhez a szüredékhez kalciumkarbonátot adunk. A szüredék daunorubicin tartalma 90 ml/l és pH-ja 7,0. Ezt mindegyik Corynebacterium simplex tenyészethez 1 :1 térfogatarányban adjuk hozzá. Az 50 ml reakciókeveréket (0,045 g/liter daunorubicint) tartalmazó lombikokat ezután az 1. példa szerinti körülmények között legalább 24 óra hosszat inkubáljuk, és a továbbiakban az 1. példa szerint dolgozzuk fel. A 24 órás, illetve 30 órás Corynebacterium simplex ATCC 6946 tenyészetek 84%-os, illetve 100%-os kitermeléssel redukálják a daunorubicint 20798 RP antibiotikummá (a használt daunorubicinre számítva). 5. példa Az 1. példában leírt körülmények között 5 Corynebacterium simplex ATCC 6946 tenyészetet állítunk elő, és a 30 órai inkubálás alatt termelt sejteket centrifugálással elválasztjuk. A különböző tisztasági fokú daunorubicin redukálását 20798 RP antibiotikummá ezeknek a sejteknek a szuszpen-10 ziójával hajtjuk végre a következő összetételű reakciókeverékekben : a) 50 ml 8,0pH-jú 0,15 mólos foszfátpuffer és 2,5 ml 10 mg/ml koncentrációjú (0,5 g/liter) vizes 15 tiszta daunorubicin oldat keveréke, b)50ml 8,0 pH-jú 0,15 mólos foszfátpuffer és 47% daunorubicint tartalmazó nyers daunorubicin 2,5 mg/ml koncentrációjú (0,24 g/liter) vizes oldat 20 keveréke, c) a 4. példa szerint előállított Streptomyces coeruleorubidus NRRL 3045 törzs tenyészetének 50 ml oxálsavas oldata, amely literenként 0,090 g 25 tiszta daunorubicint tartalmaz. Ezután a lombikokat az 1. példában leírt körülmények között 24 óra hosszat inkubáljuk, és a továbbiakban az 1. példa szerint dolgozzuk fel. 30 A 20798 RP antibiotikum kitermelése a következő volt: a) tiszta daunorubicinből kiindulva a 0,5 g/liter koncentrációjú oldatban a kitermelés 85%. 35 b) 47% daunorubicint tartalmazó nyers termék alakjában használt 0,24 g/liter koncentrációjú daunorubicin-oldatból kiindulva a kitermelés 77%. 40 c) Streptomyces coeruleorubidus tenyészet szüredékében levő 0,090 g/liter koncentrációjú daunorubicinből kiindulva a kitermelés 91%. 6. példa A következő táblázatban közölt összetételű A, B és C táptalajokat 300 ml-es tenyésztő lombikba 50 50 ml-enként szétosztva, Bacterium cyclo oxydans ATCC 12673, Streptomyces roseochromogenes ATCC 13400 és Streptomyces lavendulae ATCC 8664 törzsek tenyészeteível oltjuk be. A tenyészeteket percenként 220 fordulattal keverve 26 55 vagy 30°-on sűrű sejttömeg kialakulásáig inkubáljuk. Ezután mindegyik lombikba 1 vagy 2,5 ml 10 mg/ml koncentrációjú (0,2 vagy 0,5 g/liter) vizes daunorubicin-oldatot adunk, és a redukciót úgy hajtjuk végre, hogy a lombikokat 1—3 napig 60 ugyanolyan hőmérsékleti és keverési körülmények között tartjuk, mint amilyent a tenyészet kifejlődés folyamán alkalmaztunk. A tenyészeteket az előzőekben leírt módon dolgozzuk fel, és elemezzük. Az eredményeket az 1. táblázatban fog-65 laljuk össze. 4