168127. lajstromszámú szabadalom • Eljárás tiszta szérumalbumin biológiai folyadékokból történő izolálására

168127 5 6 zsírsav anionja kiszorítja helyéről a nem fehérje szerkezetű kísérőanyagokat, minek következtében azok kicsapódnak. A szérumalbuminból leválasztott kísérőanyagokat a kicsapott kísérő fehérjék szorbeálják; majd mindkettőt eltávolítjuk. Ily módon a kísérő fehérjéket a szérumalbuminból szelektív savas-alkoholos-denaturálással eltávolítjuk, majd 0 °C-nál magasabb hőmérsékleten kicsapjuk, a csapadékot az adszorbeált nem fehérje szerkezetű kísérőanyagokkal együtt eltávolítjuk. A folyamatot 0 °C-nál magasabb hőmérsékleten kivitelezzük, hogy ezáltal az alkoholos hatásnak kitett albumin kicsapódását megakadályozzuk. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákon szelmléltetjük: 1. példa 50 1 placenta- és abortusz vérszérum keverékéből ismert eljárással pl. a Kohn-féle (ld. 2 469 193 USA szabadalmi leírás) módszerrel eltávolítjuk a keverék gammaglobulin tartalmát. Ezután az oldathoz térfogatára számított 25%-os mennyiségben etilalkoholt adunk. A keverék hőmérsékletét 20 °C-ra állítjuk be. Ezután állandó keverés mellett 0,3% nátriumkaprilátot adagolunk a keverékhez. A fenti hőmérséklet mellett a pH-értéket 1 n sósav adagolásával 3,3-ra beállítjuk és ezt az értéket 30 percig a szérumalbumint kísérő fehérjék teljes denaturálódásáig tartjuk. Ezt követően a közeg pH-értékét 4,5-re állítjuk be, amikor a denaturált fehérjék a szérumalbuminról levált nem fehérje szerkezetű kísérőanyagokkal együtt kicsapódnak. A tiszta szérumalbumint tartalmazó oldatot a képződött csapadéktól 20 °C-on 4,5 pH mellett (a pH-értéket 1 n nátrium-hidroxid-oldattal [ állítjuk be) centrifugálással választjuk el. A kapott oldatot szűréssel tisztítjuk. A tisztított oldatból a szérumalbumint bármely ismert eljárással, pl. etilalkoholos kicsapással 20—40 térf.% etilalkoholkoncentrációt alkalmazva és —6 °C és —8 °C közötti hőmérsékleten kinyerhetjük. A szérumalbumin csapadékot ezután vízben feloldjuk és liofilizáljuk. A leválasztott szérumalbuminban elektroforézissel más fehérje nem mutatható ki, ami 100%-os tisztasági fokot jelent. A hozam: 18—22 g albumin/1 szérum (90%). 2. példa Kiindulási anyagként donor-vérplazma szolgál. 50 1 plazmából ismert eljárással (ld- 2 469 193 sz. USA szabadalmi leírás) leválasztjuk a fibrinogént, protrombint, fibrinolysint és gammaglobulin^ majd a plazmához alkoholt adunk, az alkoholtartalmat 20%-ra állítjuk be. Ezután a keverékhez 0,3% nátrium-kaprilátot adunk. A pH-értéket 1 n sósavoldattal 4,5-re állítjuk be és 10 °C-on 20 percig tartjuk. A képződött csapadékot centrifugálással leválasztjuk. A kapott folyadékban a szérumalbumin elektroforézises tisztasága kb. 92%. Amennyiben nagyobb tisztaságú termék előállítása a cél az eljárást megismételjük. Ehhez a folyadék pH-ját 1 n sósavoldattal 3,3-ra csökkentjük. A továbbiakban a folyamatot az 1. példával analóg módon kivitelezzük. Ily módon megközelítően 100%-os elektroforézises tisztaságú végterméket kapunk. Hozam: 18 g albumin/1 vérplazma. 5 3. példa Kiindulási anyagként 2,5% fehérjetartalmú placentaextraktumot alkalmazunk. A folyamatot az 1. példával analóg módon kivitelezzük, csupán a nátrium-kaprilát mennyiségét változ-10 tatjuk 0,2%-ra. 4. példa Kiindulási anyagként 50 1 marhavérszérumot alkalmazunk. A szérumhoz térfogatára számított 15 25%-os mennyiségben 96%-os alkoholt adunk. A keverékhez annyi nátrium-kaprilátot adunk, hogy koncentrációja az oldatban 0,3% legyen. Miután a nátrium-kaprilát feloldódott az oldat pH-ját 1 n sósavval 3,3-ra beállítjuk. Az oldatot 20 20 °C-on 40 percig ilyen körülmények mellett tartjuk, majd a pH-t 1 n nátrium-hidroxid-oldattal 4,5-re állítjuk be. A keletkezett csapadékot az említett hőmérsékleten és pH-értéken centrifugálással leválasztjuk. A folyadék hőmérsékletét -8 °C-ra csök-25 kentjük. A leválasztott csapadék tiszta szérumalbumint és nyomokban globulint tartalmaz. 5. példa 1 liter placenta vérszérumhoz az oldat térfogatára 30 számított 30% mennyiségben metilalkoholt adunk Ezután 0,3% nátrium-kaprilátot adunk hozzá. A pH-t 1 n sósavval 2,5-re állítjuk be és az oldatot 20 percig ezen az értéken tartjuk. Majd a pH-t 4,6-ra emeljük, amikor a szérum albumint kísérő fehérjék, a nem 35 fehérje szerkezetű anyagokkal együtt kicsapódnak. A tiszta szérumalbumint tartalmazó oldatot centrifugálással leválasztjuk. 6. példa 40 1 liter placenta vérszérumhoz az oldat térfogatára számított mennyiségben etilalkoholt adunk. Ezután az oldathoz 0,45% nátrium-kapronátot adunk. A pH-t 1 n sósavval 3,3-ra állítjuk be, és a folyamatot a továbbiakban az 1. példával analóg módon végezzük. 45 7. példa 1 liter placenta vérszérumhoz az oldat térfogatára számított 25% mennyiségben etilalkoholt adunk. A szérumhoz továbbá 0,3% nátrium-kaprinátot is adunk. 50 A pH-érték 1 n sósavval 3,3-ra történő beállítása után a folyamatot az 1. példával analóg módon kivitelezzük. 55 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás tiszta szérumalbumin biológiai folyadékokból történő izolálására, ahol a biológiai folyadékot egy rövidszénláncú alifás alkohollal és egy kar-60 bonsavsóval kezeljük, azzal jellemezve, hogy valamely albumintartalmú biológiai folyadékot az elegy súlyára számított 0,1—0,6%-os mennyiségben 6—12 szénatomos gyógyászatilag elfogadható telített alifés karbonsavsó, előnyösen nátrium- vagy káliumsó jelenlétében 65 2-5 pH-értéken az elegy térfogatára számított 3