168017. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7béta-amino-3-cefem-3-ol- 4-karbonsavszármazékok előállítására
57 168017 58 3-metoxi-7-béta-fenil-acetil-amino-3-cefem-4-karbonsav 0,5 g mannit 0,5 g 3-Metoxi- 7-béta-fenil-acetil-amino-3-cefem4-karbonsav és mannit steril vizes oldatát baktérium-mentes körülmények között 5 ml-es ampullákban vagy 5 ml-es fiolákban fagyasztva szárítjuk, az ampullákat, illetve fiolákat lezárjuk és megvizsgáljuk. 56. példa 0,5 g 3-metoxi-7-béta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem-4-karbonsav belső sóját tartalmazó szárazampullákat vagy fiolákat a következőképpen állítunk elő: összetétel (1 ampullához vagy fiolához) 3 - me t o xi-7-béta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem4-karbonsav belső só 0,5 g mannit 0,05 g A 3 -metoxi-7-b éta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem-4-karbonsav belső só és a mannit steril vizes oldatát baktérium-mentes körülmények között 5 ml-es ampullákban vagy 5 ml-es fiolákban fagyasztva szárítjuk, az ampullákat, illetve fiolákat lezárjuk és megvizsgáljuk. 57. példa 0,25 g 3-metoxi-7-béta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem-4-karbonsav belső sót tartalmazó kapszulákat a következőképpen készítünk: összetétel (4000 kapszulához): 3 - metoxi- 7 - béta-(D-alfa-fenü-glicü-amino)-3-cefem-4-karbonsav belső sója 250 000 g kukoricakeményítő 50 000 g pilivirül-pirrolidon 15 000 g magnézium-sztearát 5 000 g etanol q.s. A 3 -metoxi-7-b éta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem-4-karbonsav belső sóját és a kukoricakeményítőt elegyítjük és 50 g etanolban oldott polivinil-pirrolidonnal megnedvesítjük. A nedves masszát 3 mm lyukbőségű szitán átnyomjuk és 45°-on megszárítjuk. A száraz szemcséket 1 mm lyukbőségű szitán átszitáljuk és elkeverjük 5 g magnézium-sztearáttal. A keveréket 0,320 g adagokban 0 nagyságú kapszulákba 58. példa 256,3 g 3-metoxi-7-béta-(D-alfa-terc-butil-oxi-karbonii-amino-alfa-fenil-acetil-amino)-3-cefem4-karbonsav-difenil-metil-észterhez hozzáadjuk 250 ml anizol és 1200 ml metilén-klorid elegyét és 0°-on 1200 ml, 0°-ra előre lehűtött trifluor-ecetsawal kezeljük. 30 percig 0°-on állni hagyjuk, majd a reakcióelegyet 15 perc alatt felhígítjuk 12 000 ml 0°-ra lehűtött dietiléter/petroléter 1:1 keverékkel. A 3-metoxi-7-béta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem4-karbonsav kicsapódott trifluor-ecetsavas sóját leszűrjük, dietil-éterrel mossuk, csökkentett nyomáson megszárítjuk és 1900 ml vízben feloldjuk. A sárga színű szennyezések eltávolítása céljából 900 ml ecetsav-etilészterrel mossuk; a szerves mosófolyadékot elöntjük és a vizes oldatot (pH~l,5) 20%-os metanolos trietil-amin-oldattal pH 4,5-re állítjuk be. A 3-metoxi-7-béta-(D-alfa-fenil-glicil-amino)-3-cefem4-karbonsav belső sója színtelen prizmás dihidrát-formában kristályosodik ki; 1800 ml aceton hozzáadása és 0°-on való 2 órás keverés után leszűrjük. Olvadáspont 175-177° (bomlással); [a]^ = + 138° ± 1° (c = 1,0,1 N sósavban); ultraibolya abszorpciós spektrum (0,1 n vizes nát-5 rium-hidrogén-karbonát-oldatban): X,^ = 265 rrui ( = 6500); infravörös abszorpciós spektrum (ásványi olajban): sávok 2,72, 2,87, 3,14, 3,65, 5,68, 5,90, 6,18, 6,27, 6,56, 6,92, 7,16, 7,58, 7,74, 7,80, 8,12, 8,30, 8,43, 8,52, 8,65, 8,95, 9,36, 9,55, 9,70, 10,02, 10 10,38, 10,77, 11,70, 12,01, 12,15, 12,48, 12,60, 12,87, 13,45 és 14,30 /i-nál; mikroelemzés (C16 H 17 O s N 3 S • 2 H 2 0; molekulasúly: 399,42): számított: C 48,11%, H 5,30%, N 10,52% és S 8,03%; talált: C 47,86%, H 5,27%, N 10,47% és S 8,00%. 15 A fenti példákban használt kiindulási anyagot például a következőképpen állíthatjuk elő: A) 3-Hidroxi-metil-7-béta-fenil-acetil-amino-3-cefem4-karbonsav nyers nátriumsójából (előállítva 3-acetil- oxi - metil - 7 - béta- fenil - acetű -amino-3-cefem4-20 karbonsav nátriumsójának enzimatikus dezacetilezésével Bacillus subtilis ATCC 6633 törzséből nyert tisztított enzimkivonat segítségével, majd az oldat liofilezésével) 11,82 g-ot feloldunk 200 ml vízben, rárétegzünk 400 ml ecetsav-etil-észtert és a pH-t vizes 25 foszforsavoldattal 2-re állítjuk be. A vizes fázist leválasztjuk és újra extraháljuk 2 x 150 ml ecetsav-etilészterrel. Az egyesített szerves kivonatokat 4 x 50 ml vízzel mossuk, magnézium-szulfát felett szárítjuk, majd 400 ml-re bepároljuk. Az oldathoz feles mennyi-30 ségű diazo-metánt adunk, 3 órán át állni hagyjuk szobahőmérsékleten, majd a szemcsés kristályos csapadékot leszűrjük. A szűrletet 200 ml-re bepároljuk, melegen ciklohexánt adunk hozzá, és szobahőmérsékletre lehűtve egy ideig 4°-on állni hagyjuk. A csa-35 padékot leszűrjük és aceton/ciklohexán leegyből átkristályosítjuk; a kapott 3-hidroxi-metil-7-béta-fenil - acetil - amino - 3 - ce fem - 4 - kárbonsav olvadáspontja 176-176,5° (korrekció nélkül); [a] j° = -6" ± 1" (c = 1,231 kloroformban); rétegkromatogram (szilika-40gél; kimutatás jódgőzzel vagy X,54 ultraibolyafénnyel): Rf = 0,42 (rendszer: kloroform/aceton 4:1), Rf = 0,43 (rendszer: toluol/aceton 2:1), és Rf = 0,41 (rendszer: metilénklorid/aceton 6:1). 1,03 g 3-hidroxi-metil-7-béta-fenil-acetil-amino-3-45 cefem4-karbonsav-difenil-metil-észtert és 1,05 g N-me til-N ,N'-diciklo-hexil-karbodiimidium-jodidot nitrogénatmoszférában feloldunk 25 ml abszolút tetrahidrofuránban és 1 óráig 35°-on melegítjük. Ezután újra hozzáadunk 15 ml abszolút tetrahidrofuránban 50 oldott 1,05 g N-metil-NJN'-diciklohexil-karbodiimidium-jodidot és szobahőmérsékleten nitrogénatmoszférában 17 óráig állni hagyjuk. A reakcióelegyből az oldószert forgó vákuumbepárlóban távolítjuk el. A maradékot felvesszük metilén-kloriddal és 50 g szüika-55 gélt tartalmazó oszlopon (10% desztillált vizet hozzáadva) átszűrjük; átmossuk 4 x 100 ml metilén-kloriddal. Az eluátumot kis térfogatra bepároljuk és szilikagéloszlopqn (90 g; 10% desztillált víz hozzáadásával dezaktiválva) kromatografáljuk. 900 ml össztérfogatú 60 3:7 arányú toluol/metilénklorid eleggyel eluáljuk az apoláros szennyezéseket. A 3-jód-metil-7-béta-fenila c etil-amino-3<efem4-karbonsav-difenil-metil-észtert 2 x 200 ml metilénkloriddal eluáljuk; a rétegkromatográfiásan egységes frakciókat benzolból liofilezzük; 65 infravörös abszorpciós spektrum ímetilén-kloridban): 29
