167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására
11 167968 12 elegyből átkristályosítjuk. Ilyen módon kb. 10 g DL-1 -ciklohexenilglicin-metilésztert kapunk. Mágneses rezonanciaspektrum (oldószer: D2 0) eltolódások (8, mmp): 1,7 (széles; a gyűrű 4-es és 5-ös szénatomjának 4 protonja), 2,05 (széles; a gyűrű 2-es és 6-os szénatomjának 4 protonja), 3,92 (szingulett; a metilcsoport 3 protonja), 4,64 (szingulett; az a-szénatom 1 protonja), 6,21 (széles; a gyűrű olefinkötésű szénatomjának 1 protonja). D-l -ciklohexenilglicin-metilészter 10 g DL-l-cikholexenüglicin-metilészter-hidroklorid 1000 ml vízben készített oldatának pH-ját 2N nátrium-hidroxid-oldattal 7,2-re állítjuk be, majd az oldathoz hozzáadunk 1 g kereskedelmi minőségű kimotripszint (a Sigma Chemical Company, Missouri, USA által forgalomba hozott „a-kimotripszin", aktivitása 50 egység/mg). Az elegyet 2 órán keresztül 23 C°-on inkubáljuk, miközben pH-ját IN nátrium-hidroxid-oldat hozzáadásával 7,2 értéken tartjuk. A fenti idő eltelte után az elegy pH-ját 5N nátrium-hidroxid-oldattal 8,0-ra állítjuk be, majd 5 x 1300 ml dietiléterrel extraháljuk. Az éteres fázist 25 C°on vákuumban szárazra párolva olajos, barna párlási maradékot kapunk. A maradékhoz hozzáadunk 100 mi sósavval telített metanolt, majd az elegyet vákuumban bepároljuk. A kapott maradékhoz cseppenként 30 ml dietilétert adva, majd az elegyet bepárolva 3,5 ml D-1-ciklohexenilglicin-metilésztert kapunk. A termék fajlagos forgatása, (a)2 ^ = -115° (c = 0,5, 0,1 N sósav). Az anyag mágneses magrezonancia-spektruma megegyezik a DL-1-ciklohexenilglicin-metilészterével. 1. táblázat Mikroorganizmus A keletkezett cefalosporin-származék mennyisége, mg/ml. ABC 10 Mycoplana dimorpha IFO-13213 Mycoplana bullata IFO-13267 Protaminobacter alboflavus IFO-13221 Acetobacter acetosus IFO—3296 15 Gluconobacter albidus IFO-3251 Acetobacter aurantium IFO—3245 Acetobacter aurantium IFO—3249 Gluconobacter cerinus IFO—3262 Gluconobacter indust-20 rius IFO-3260 Gluconobacter dioxy-acetonicus IFO-3272 Gluconobacter gluconicus IFO-3171 25 Gluconobacter liquefaciens IFO-12388 Gluconobacter melanogenus IFO-3293 Gluconobacter oxydans IFO-3189 30 Acetobacter pasterianus Gluconobacter suboxydans IFO-Acetobacter turdidans IFO-35 Acetobacter xylinum IFOAcetobacter xylinum IFQXanthomonas citri IFOXanthomonas pruni IFOXanthomonas oryzae IFO-40 Pseudomonas aeruginosa IFO-3454 Pseudomonas maltophila IFO-12690 Pseudomonas melanogeum IFOPseudomonas vendrelli IFO-2,1 1,8 1,5 0,6 0,1 0,2 6,5 1,3 0,4 6,8 7,4 0,9 2,3 0,1 0,4 0,8 1,2 0,4 3130 •3225 -3144 •3288 3835 •3780 3995 45 Aeromonas hydrophila IFO-1. példa Az 1. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos ferde lemezes tenyésztéssel kapott tenyészeteit 30 ml I. tápközeget tartalmazó edényekbe visszük, majd az edényeket 20 órán keresztül 28 C°-on __^_ rázatjuk. A fenti idő elteltével a sejteket centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 0,05 M foszfátpufferrel 50 Megjegyzés: A mossuk, majd a szuszpenziókhoz 4% fenilglicin-metilésztert és 3 ml olyan 0,1N vizes dikálium-hidrogénfoszfát-oldatot adunk, amely 4% fenilglicin-metilésztert(l)és -12020 3899 3820 3,6 1,1 0,1 3,5 2,5 0,3 0,5 0,4 0,2 0,6 0,4 0,2 0,3 0,2 0,1 0,5 0,2 0,4 2,? 1,1 0,8 1,0 1,1 0,5 IFO-3223 8,2 4,1 4,0 1,8 1,0 0,5 6,5 5,2 4,8 8,2 4,5 2,8 8,0 4,0 4,0 6,8 2,9 2,2 4,8 2,5 2,4 8,0 8,2 3,0 0,2 0,4 0,5 2.0 1,0 1,2 3.1 0,4 1,0 0,2 0,4 0,3 0,1 0,1 0,1 a) 2% 7-aminocefalosporánsavat vagy b) 2% 7-amino-3-dezacetoxicefalosporánsavat vagy c) 2% 7-amino-3-metoximetil-3-cefém4-karbonsavat tartalmaz. Az Oldat pH-ját 2N sósavoldattal 6,0 értékre állítjuk be, majd az elegyeket 40 percen keresztül 37 C°on rázatjuk. A reakcióelegyekben levő cefálosporin-származékót bioautográfiával azonosítjuk, mennyisegét biológiai módszerrel határozzuk meg. 55 az 1 .és a) jelű vegyületből képződött! 7-(a-aminofenilacetamido)-cefalosporánsav. B: az 1. és a b) jelű vegyületből képződött 7-(a-aminofenilacetamido)-3-dezacetoxicefalosporánsav C: az 1. és a c) jelű vegyületből képződött 7<a-aminofenilacetamido)-3-metoximetil-3-cefém—4-karbonsav. 60 2. példa A 2. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét 20 ml 2. táblázatban megadott tápközegben szuszpendáljuk, majd a szuszpenziókat 1 65 napon keresztül 28 C°-on rázatjuk. A tenyészeteket 6
