167968. lajstromszámú szabadalom • Eljárás cefalosporin-származékok előállítására

21 167968 22 Mikroorganizmus a képződött „A" jelű vegyület menynyisége mg/ml Bacillus sphaericus Bacillus firmus Bacillus pumilus IFO-3526 IFO-3330 IFO-12 090 0,04 0,02 0,04 képződött„P" Mikroorganizmus jelű vegyület mennyisége mg/ml Acetobacter pasteurianus IFO-3223 4,4 Acetobacter turbidans IFO-3225 3,4 Acetobacter aurantium IFO-3245 2,4 Pseudomonas maltophila IFO" -12 690 5,4 Pseudomonas melanogenum IFO-12 020 8,8 Xanthomonas citri IFO-3829 7,9 Xanthomonas oryzae IFO-3827 8,6 Protaminobacter alboflavus IFO-13 221 5,5 Mycoplana dimorpha IFO-13 213 2,1 16. példa Pseudomonas melanogenum IFO—12020 és Protaminobacter alboflavus IFO—13221 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 2% fenilglicinmetilésztert és 4% 7-amino-3-(l-oxodipirid-2-il-tiometil)-3-cefém-4-karbonsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-(a-aminofenilacetamido)-3-( 1 -oxidpirid-2-il-tiometil)-3-cefém-4-karbonsavat („P" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 13. táblázatban foglaltuk össze: 13. táblázat 10 15. példa A 12. táblázatban megadott mikroorganizmusok 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 M foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 15 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 15 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 4% fenilglicinmetilésztert és 2% 7-amino-3-(-oxidopirid-2-il-tiometil)-3-cefém4-karbonsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett 7-(a-aminofenilacetamido)-3-( 1 -oxidopirid-2-il-tiometil)-3-cefém-4-karbonsavat („P" jelű vegyület) bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A kapott eredményeket a 12. táblázatban adtuk meg. 12. táblázat Mikroorganizmus képződött „P" jelű vegyület mennyisége, mg/ml 15 Pseudomonas melanogenum IFO-12 020 Protaminobacter alboflavus IFO-13 221 8,5 6,0 20 17. példa Xanthomonas oryzae IFO-3995 3 napos tenyészetét 20 ml I. tápközegbe oltjuk át és a tápközeget rázás közben 1 napon keresztül 28 C°-on inkubáljuk. A kapott tenyészetet 500 ml I. tápközegbe oltjuk át és a 25 közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással elkülönítjük, 500 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 50 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 50 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-hid-30 rogén-foszfát-oldatot adunk, amely 2% 2-tienilglicinmetilésztert és 4% 7-aminocefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletke-35 zett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosítjuk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy 6,2 mg/ml %7-[a-amino-(2-tienil)-acetamido]-cefalosporánsavat tartalmaz. 40 18. példa Acetobacter turbidans IFO-3225 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután 45 centrifugálással elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel mossuk, majd ugyanezen pufferoldat 3 ml-ében szuszpendáljuk. A szuszpenzióhoz 3 ml olyan vizes 0,1 N dikálium-dihidrogén-foszfát-oldatot adunk, amely 2% 2-tienilglicin-metilésztert és 4% 50 7-amino-3-dezacetoxi-cefalosporánsavat tartalmaz. Az oldat pH-ját 2N sósavoldattal előzetesen 6,0 értékre állítottuk be. Az elegyet rázás közben 30 percen keresztül 37 C°-on inkubáljuk, majd a keletkezett cefalosporin-származékot bioautográfiával azonosít-55 juk és koncentrációját biológiai módszerrel meghatározzuk. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy 5,6 mg/ml. 7-[a-amino-(2-tienil)-acetamido]-3-dezacetoxicefalosporánsavat tartalmaz. 60 19. példa Xanthomonas oryzae IFO-3288 és Acetobacter pasteurianus IFO-3223 3 napos tenyészetét 30 ml I. tápközegbe oltjuk át és a közeget 20 órán keresztül 28 C°-on rázatjuk. A sejteket ezután centrifugálással 65 elkülönítjük, 30 ml 6,0 pH-jú 0,05 N foszfátpufferrel 11