167946. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bacitracin kinyerésére fermentléből
167946 3 4 2 985 534 és 3 021 217 lajstromszámú USA szabadalmi leírás. így pl. a 2 809 892 számú USA szabadalmi leírás szerint bacitracin-tartalmú fermentléhez savanyítás után vízoldható cinksót adnak, majd az elegy pH-ját megnövelve leválasztják a cink-bacitracint, elkülönítik és szárítják. A kapott fémkomplexek stabilak, de az antibiotikum koncentráció nem növelhető 4-8% fölé, mert a fémhidroxidok egyidejű leválása növeli a csapadék ballasztanyag tartalmát, amitől csak bonyolult eljárásokkal, így például ioncserélő-oszlopon történő átvezetéssel tudják a terméket megtisztítani (2 834 711 lajstromszámú USA szabadalmi leírás). A találmány célja stabil, nem toxikus, nagy hatóanyag-tartalmú, komplex képzésre hajlamos, kétértékű fém-, előnyösen Zn-bacitracin előállítása jó hatásfokkal és egyszerű, gazdaságos technológiával. Találmányunk alapja az a telismerés, hogy a leválasztásra adagolt komplex képzésre hajlamos, kétértékű fémionok, előnyösen Zn-ionok feleslege növeli mind a kitermelést, mind a termék hatóanyagtartalmát, ha gondoskodunk arról, hogy a keletkező fémhidroxid oldatban maradjon. Azt találtuk, hogy ha a komplexképzést NHJ ionok jelenlétében végezzük, 30-40% bacitracint tartalmazó termék állítható elő. A találmány értelmében úgy járunk el, hogy a megsavanyított és leszűrt fermentléhez komplex képzésre hajlamos, kétértékű fémsó, előnyösen cinksó mellett valamely ammóniumsót adunk, majd az oldat pH-ját megnövelve leválasztjuk a bacitracin-komplexet, elkülönítjük és szárítjuk. A kétértékű fémsót feleslegben adagoljuk. Előnyösen úgy járunk el, hogy az ammóniumsó, előnyösen ammónium-szulfát egy részét a fermentlé szűrése előtt, 2,5-3 pH-értéken adagoljuk az oldatba, így javul az oldat szűrhetősége, az ammóniumsó, például ammónium-szulfát a kísérő egyéb fehérjék jelentős mennyiségét is lecsapja. A találmány szerinti eljárás előnye, hogy költséges anyagokat nem igényel, nincs szükség a reagensek regenerálására. A kitermelés 70 és 90% közötti, a hatóanyag-tartalom 38—44%. A stabil fémkomplex 1-2 évig tárolható, a nagy hatóanyag-tartalom jelentősen csökkenti a szállítási költségeket. A találmány szerinti eljárás ezen túlmenően jelentős előnnyel rendelkezik az oldószeres extrakcióval vagy egyéb vegyszeres komplex képző eljárásokkal szemben. A fémbacitracin leválasztása után maradó oldat, mivel semmilyen mérgező anyagot sem tartalmaz, közveltenül bevezethető a szennyvízhálózatba. A találmány szerinti eljárást a példákban részletesen ismertetjük oly módon, hogy a Zn-ionok mennyiségét különböző, növekvő koncentrációkban választottuk meg. A kapott termék hatóanyag-tartalmát mikrobiológiai úton, a Micrococcus flavus ATCC 10240 tesztorganizmussal határoztuk meg. 1. példa 7,8 pH-értékű, 312 E/ml bacitracin tartalmú fermentléhez anyag súlyára számítva 10 s% (NH*^ S04-t adunk, pH-ját cc. kénsawal pH = 3 értékre állítjuk be, az oldatot élesre szűrjük, a nyert 500 ml szűrlethez további 10% (NE^SCM és 2,5 g ZnS04 . 7 H2 0-t adunk. A pH-t 7,5 értékre állítjuk ammónium-hidroxiddal, keverjük és szűrjük. Az elkülönített csapadékot 40 C°-on vákuumban szárítjuk. így 5 6,3 g 37,2% bacitracin-tartalmú terméket kapunk, 75,0%-os kitermeléssel. 2. példa 500 ml 320 E/ml bacitracint tartalmazó 3,2 10 pH-értékű fermentléhez 50 g (NROSCM és 5 g ZnS04 -t adunk. Ezután a pH-t 7,2-re állítjuk be NaOH-oldattal, majd szűrjük. A csapadékot vákuumban 40 C°-on szárítjuk. A kapott 5,6 g termék 40% bacitracint tartalmaz, kitermelése 70,4%. 15 3. példa 2000 ml 330 E/ml bacitracin tartalmú, 3 pH-értékű szűrlethez 200 g (NH^SCM és 9,12 g Zn-ionnak megfelelő vízoldható Zn-sót adagolunk. Az 20 elegy pH-ját 7,5 > értékre állítjuk be ammónium-hidroxiddal- A csapadékot leszűrjük, majd 35 C°-on vákuumban szárítjuk. Az ily módon előállított koncentrátum bacitracin-tartalma 38,5%, súlya: 28,3 g kitermelése 82,5%. 25 4. példa 1000 ml élesre szűrt fermentléhez, melynek bacitracin-tartalma 292 E/ml, pH-ja 3,0, 10 g (NH,)2 S04 -t és 6,8 g Zn-iont tartalmazó Zn-sót adunk. Az 30 oldat pH-ját ammónium-hidroxiddal 8,3 értékre állítjuk, a szuszpenziót keverjük, majd leszűrjük. A csapadékot 30 C°-on vákuumban szárítjuk. A kapott termék 15,7 g, bacitracin-tartalma 30%, kitermelés: 80,5%. 35 5. példa 285 E/ml bacitracint tartalmazó fermentlé pH-ját kénsawal 2,8 értékre állítjuk be és az oldat súlyára számítva 10% (NH^SCM adunk hozzá. 1500 ml 40 élesre szűrt fermentléhez 150 g (NHOzSCVt és 60 g Zn S04 • 7 H 2 0-t adagolunk, a pH-t 8-fa állítjuk be ammónium-hidroxiddal. Keverés után a csapadékot elkülönítjük, majd 40 C°-on vákuumban szárítjuk. Az ily módon nyert termék súlya 25 g, 30,8% bacitracint 45 tartalmaz, a kitermelés 90,3%. Szabadalmi igénypontok. 1. Eljárás bacitracin kinyerésére komplexképzéssel 50 bacitracin fermentléből valamely vízoldható kétértékű fémsónak, előnyösen cinksónak a megsava-v nyitott és szűrt fermentléhez feleslegben történő hozzáadása, a bacitracin-komplexnek a pH emelésével történő kicsapása, a termék elválasztása és szárítása 55 útján, azzal jellemezve, hogy a fermentléhez NH^"-ionokat adunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az NH4 -ionokat a szűrt fermentléhez adjuk. 60 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az NHÍ-ionok egy részét szűrés előtt adjuk a fermentléhez és a fennmaradó részt a szűrt oldathoz adjuk. ~) A kiadásért felelős: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76-1154 - Dabasi Nyomda, Budapest - Dabas Felelős vezető: Földes György igazgató
