167750. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-demetil vindolin vagy N-demetil-vinblasztin előállítására vindolin vagy vinblasztin streptomyces albogriseolus-szal végzett demetilezésével

5 167750 6 adunk, és a tenyésztést nem 5, hanem 6 napon át folytatjuk. A fermentáció végén 3 liter tenyészlé pH-ját 10%-os vizes hidrogénkloriddal 4,6-ra állítjuk be. A savas szuszpenzió szűrése után 2X1 liter metiléndikloriddal extraháljuk a szűrletet. Egyesítjük az extraktumokat, és vízmentesítés után a metilénklorid eltávolítására csökkentett nyomáson desztilláljuk. Desztillációs maradékként 537 mg terméket kapunk. Ezt a terméket pH-gradiensextrakcióra 50 ml 0,1 mólos, pH 2,3 citromsavban oldjuk. Az oldatot 2 X 25 ml metiléndikloriddal extraháljuk, majd egyesítjük az extraktumokat. 3,0-ra állítjuk be az oldat pH-ját, majd megismételjük az extrakciót. A továbbiakban a pH-t 5,0-ig növelve megismételjük az extrakciókat. Az 1. táblázatban megadjuk a pH-gradiens-extrakció eredményeit. 1. tábl ázat Desztillációs maradék pH (mg) A. 2,3 230 mg B. 3,0 87 mg C. 3,5 60 mg D. 4,0 25 mg E. 4,5 12 mg F. 5,0 9 mg A kétdimenziós vékonyrétegkromatográfiás és az alumíniumoxiddal végzett nagynyomású folyadékkromatográfiás vizsgálat szerint a D és az E frakciók N-demetil-vinblasztint tartalmaznak. A példában megadott eljárással előállított N-demetil-vinblasztin tulajdonságai megegyeznek a 3 354 163 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban megadott eljárással előállított autentikus N-de-5 metil-vinblasztinéival. Az N-demetil-vinblasztint elkülöníthetjük az alkaloidkeveréket tartalmazó tenyészléből kromatográfiás úton, előnyösen nagynyomású folyadékkromatográfiával is. 10 Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás a II általános képletnek megfelelő N-demetil-vindolin — ahol R hidrogénatom és R' hidrogénatom — vagy N-demetil-vinblasztin — ahol R hidrogén-15 atom és R' III képletű csoport — előállítására azzal jellemezve, hogy a II általános képletnek megfelelő vindolint, illetve vinblasztint — ahol R jelentése metilcsoport és R' a fentiekben megadott —• Streptomyces albogriseolus NRRL 5748 törzs süllyesztett fermentáció-20 jávai nyert tenyészléhez adva demetilezzük, majd az előállított N-demetil-vegyületet elkülönítjük a tenyészlétől. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a II általános képlet körébe tartozó N-demetil-vindo-25 lin — ahol R és R' hidrogénatom — előállítására azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként vindolint használunk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja a II általános képlet körébe tartozó N-demetil-30 -vinblasztin előállítására — ahol R hidrogénatom és R' III képletű csoport — azzal jellemezve, hogy kiindulási anyagként vinblasztint használunk. 1 lap rajz 1 db rajz A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 77.3158.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató