167714. lajstromszámú szabadalom • Eljárás glicerinkináz kinyerésére mikroorganizmusokból

9 167714 10 A csapadékot 0,05 mólos káliumfoszfát pufferoldattal (pH 7,0) felvesszük, és ugyanilyen pufferoldattal szemben egy éjszakán át hűtött helyiségben dializáljuk. A dializátumhoz annyi nátriumkloridot adunk, hogy az 0,1 mólos legyen és az oldatot DEAE-Spehadex oszlopra viszszük. Az oszlopot 7,0 pH-értékű pufferoldattal (0,05 mólos káliumfoszfát és 0,125 mólos nátriumklorid) mossuk, majd a glicerin-kinázt ugyanezen pufferoldattal, amely azonban 0,2 mól nátriumkloridot tartalmaz, eluáljuk. Az eluátumhoz lassan, kis részletekben 2,4 mól vég-2. táblázat Lépés ml Aktivitás Kitermelés, % Nagynyomású diszpergálás extraktuma 5000 2,45 • 104 100 Protaminszulfátos oldat 8900 2,2 • 10* 90 DEAE-Sephadex-es eluátum 1590 1,89 • 104 77 Oldat a 60 C°-os hőkezelés után 1370 1,64 • 104 67 2,05 mólos ammóniumszulfátos oldat 145 1,40 • 104 57 Dializátum 45 1,32 • 104 54 Eluátum DEAE-Sephadexről 95 1,08 • 10* 44 koncentrációig ammóniumszulfátot adunk, ekkor a glicerin-kináz kikristályosodik. Kitermelés: 135 mg, a fajlagos aktivitás: 80 egység/mg. Az alábbi táblázat az eljárás egyes lépcsőiben elért hozamot és aktivitást tartalmazza. Szabadalmi igénypontok: 10 1. Eljárás glicerinkináz-enzim kinyerésére glicerinkinázt termelő mikroorganizmusokból, előnyösen Candida mycoderma vagy Oospota lactis törzsekből, azzal jellemezve, hogy az adott esetben megszárított mikroorganizmusokat nagynyomású diszpergálással feltárjuk, 15 majd protaminszulfáttal lecsapjuk, a csapadékot elkülönítjük és a szüredéket önmagában ismert módon cellulóz- vagy dextrán-bázisú anioncserélővel kezeljük, majd kívánt esetben a keletkezett terméket önmagában ismert módon 60 C° körüli hőmérsékletre való felmele-20 gítéssel, ammóniumszulfáttal való frakcionálással, közbeiktatott második 60 C°-ra való felmelegítéssel, dialízissel és anioncserélő kromatográfiával tovább tisztítjuk 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy 10 C° alatti hőmérsékleten dolgo-25 zunk. 3. Az 1. és 2. igénypontok szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy alapanyagként a Candida mycoderma mélyhűtéssel nyert kifagyasztott pasztáját vagy liofilizátumát dolgozzuk fel. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.3155.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató 5