167703. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kapcsolt penicillinaciláz előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1972. XI. 22. (BA—2828) Elsőbbsége: Német Szövetségi Köztársaság 1971. XI. 23. (P 21 57 972.6) Közzététel napja: 1975. VII. 28. Megjelent: 1976. XII. 31. 167703 Nemzetközi osztályozás: C 08 g 20/00 C 08 g 41/02 C 12 d 13/10 4<PMI JUH Feltaláló: Dr. Hüper Fritz vegyész, Wuppertal, Német Szövetségi Köztársaság Tulajdonos: Bayer Aktiengesellschaft, Leverkusen, Német Szövetségi Köztársaság Eljárás hordozóhoz kapcsolt penicillin-aciláz előállítására A találmány hordozóhoz kapcsolt, a 6-aminopenicillánsav (6—APS) előállítása során a penicillinek hidrolitikus hasításához alkalmazható penicillin-aciláz előállítására vonatkozik. Ismert, hogy néhány mikroorganizmus fajta penicillin-aciláz enzimet termel (E. C. 3. 5. 1. 11). amelynek hatására a penicillinek, például a penicillin G oldalhelyzetű karbamidcsoportja hidrolitikusan bomlik anélkül, hogy egyidejűleg a béta-laktámgyfirű is bomlana. Az 1111 778 sz. német szövetségi köztársaságbeli szabadalmi leírásban ismertetett eljárás a 6—APS-nek a G-penicillinből történő nagyüzemi gyártására ennek az enzimnek a hatásán alapul. A technika mai állása szerint a nagyüzemi gyártásnál baktériumokból, főleg E. coli baktériumokból álló iszapot alkalmaznak. Ennek az eljárásnak a következő hátrányai vannak: a) A baktériumiszap az intracelluláris penicillinaciláz mellett proteinokat és enzimeket, valamint táptalajmaradékokat vagy ezeknek a fermentáció során képződött átalakulási termékeit is tartalmazza. Ezek a szennyeződések feldolgozáskor nem moshatók ki teljesen a kristályos 6—APS-ből. b) A baktériumiszap szennyeződéseket, egyéb enzimeket tartalmaz, amelyek a G-penicillint és/vagy a 6—APS-t inaktívvá teszik a beta-laktámgyűrű felnyitása által. c) A baktériumiszapot az eljárás során csak egyszer lehet alkalmazni. d) A baktériumiszapban a penicillin-aciláz csak csekély mértékben van jelen. Több enzim alkalmazá-5 sa — például rövidebb reakcióidő és ezúttal jobb 6—APS-hozam elérése céljából a bontási termékekből adódó szennyeződés csökkentése mellett — gyakorlatilag lehetetlen. e) A 6—APS hozama a mindenkori fermentációs 10 elegy ingadozó penicillin-aciláz-képzésétől függ. í) A 6—APS elegy feldolgozásakor a baktériumsejtek teljes elválasztása többletműveletet jelent, amelynek során a hozam csökken. A proteinszerű, allergiás reakciókat előidézni képes szennyeződések 15 eltávolítása céljából további tisztítási műveletekre van szükség (lásd: 1169 696,1078 847,1114 311 sz. angol szabadalmi leírások; 1909 915 sz. NSZK-beli nyilvánosságrahozatali irat). 20 Különböző kísérletek folytak a célból, hogy az enzimeket valamilyen szilárd fázishoz kössék és így oldhatatlanná tegyék (az erre irányuló ismert eljárások jó összefoglalása Stark G. R. „Biochemical Aspects of reactions on Solid Supports" című dolgoza-25 tában (1971, Academic Press, London, p. 13) található. Ezek a módszerek azonban ipari megvalósításra nem alkalmasak, mert az elérhető hozam csekély. A találmány tárgya eljárás hordozóhoz kapcsolt penicillin-aciláz előállítására, amelynek során akril-30 amid, N,N'-metilén-bisz-akrilamid és maleinsav mo-167703 £1