167658. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a metanobaktériumos fermentáció B12-vitamin hozamának növelésére
11 167658 12 Bj a-vitaminnal egyenlő biológiai értékű faktorokkal kiegészített érték 33650 /ug/1. A fennen tie B, a-vitamin tartalom növekedése a kiindulási 11950 /ug/1 szinthez viszonyítva 217,1%. 5. példa 10 literes kísérleti üvegfermentorba 9000 ml 11870 ptg/1 B12 -vitamin tartalmú, a 159.356 lajstromszámú szabadalmi leírás szerinti félfolyamatos eljárás- 10 sal készített, az 1. példában megadott mezofil metántermelő vegyes mikropopulációt tartalmazó üzemi fermentlevet töltünk. A fermentléhez 100 ml 28-30 C°-os, az alábbi táptalajkomponenseket tartalmazó csapvizet mérjük be: 15 ammóniumhidrogénkarbonát 6g ammóniumhidroxid 24%-os 2 ml diammóniumhidrogénfoszfát 0,6 g ammóniumszulfát 2,0 g sörélesztőhidrolizátum 20%-os 1 ml 20 kobaltklorid 0,01 g borostyánkősav 0,006 g o-xilidin , 0,02 g magnéziumklorid 0,1 g metanol 100 ml 25 A táptalajhoz folytatólag 0,006 g 5,6-dimetilbenzimidazolból és 9 g kukoricalekvárból előzetesen előállított vízoldható komplexet adunk. A fenti táptalaj lényegében ammónium-nitrogénben és metanol-szénben kifejezett nitrogén-szén súlyaránya 1:14. 30 A továbbiakban az 1. példában leírt módon járunk el, naponta 100 ml 28-30 C°-u csapvízben a fenti táptalajkomponenseket tartalmazó táptalajt adunk. A kilencedik napon a fermentációt az 1. példában leírt módon félfolyamatossá alakítjuk át. A fermentlé 35 aliquot részéből meghatározzuk annak összes nitrogén és szén tartalmát. Az elemzés alapján a fermentlé összes nitrogén tartalma (Npö) 3254 mg/l, összes szén tartalma (CFo ) 10520 mg/l. Ezután az elvett fermentlé térfogatával azonos 40 térfogatú 20-28 C°-u csapvízbe az alábbi tápanyagokat mérjük be: ammóniumhidrogénkarbonát 7,5 g ammóniumhidroxid 24%-os 2,5 ml diammóniumhidrogénfoszfát 0,75 g 45 ammóniumszulfát 2,5 g sörélesztőhidrolizátum 20%-os 1 ml kobaltklorid 0,025 g borostyánkősav 0,006 g o-xilidin 0,02 g 50 magnéziumklorid 0,1 g metanol 120 ml A táptalajba folytatólag 0,015 g 5,6-dimetil-benzimidazolból és 10 g kukoricalekvárból előzetesen előállított vízoldható komplexet adunk. Az összes 55 táptalajkomponens beadagolása után a táptalaj ammónium-nitrogénben és metanol-szénben kifejezett aránya 1:15. A továbbiakban az 1. példa szerint járunk el. A kilencedik napon meghatározzuk a fermentlé Bi2-vitamin tartalmát, amely 34650 jug/1 Bi2 -vita- 60 min. A Bi 2 -vitaminnal egyenlő biológiai értékű faktorokkal kiegészített érték 41320 MgA- A fermentlé Bi 2-vitamin növekedése a kiindulási 11870 jug/1 szinthez viszonyítva 300,2%. 65 6. példa 10 literes kísérleti üvegfermentorba 9000 ml 11870 jug/ml B12-vitamin tartalmú, a 159.356 lajstromszámú szabadalmi leírás szerinti félfolyamatos eljárással készített, az 1. példában megadott mezofil metántermelő vegyes mikropopulációt tartalmazó üzemi fermentlevet töltünk. A továbbiakban az 5. példa szerinti táptalaj adagolással a fermentlé Bi2 -vitamin szintjét 35000 jug/l-re emeljük fel, majd a kilencedik napon félfolyamatos üzemelésre térünk át. Ily módon folytatjuk a fermentációt két héten át. A fermentlé B12 -vitamin tartalma ezen idő alatt változatlanul 35000 jug/1. Ezután naponta két ízben, 12 óránként a fermentlé térfogatának 10%-át vesszük el és helyébe 1 liter, az 5. példában a folyamatos üzemelésre megadott 1:12 arányú tápanyagot adagoljuk be. A 12 óránkénti elvétellel és betáplálással végzett fermentációt három héten át tovább folytatjuk. Az ezen utóbbi három héten át végzett fermentáció Bt 2 -vitamin átlagértéke 34500 jug/ml, a B 12 -vitaminnal egyenlő biológiai értékű faktorokkal kiegészített érték 43470 /xg/1. A fermentlé Bi2 -vitamin növekedése a kiindulási 11870 jug/1 szinthez viszonyítva 290%. 7. példa Mindenben a 6. példa szerint járunk el azzal a változtatással, hogy a napi második táptalaj beadagolásnál a tápanyagok 50%-át tápláljuk csak be. A fermentlé Bi2 -vitamin értéke több héten át 26000 /Kg/l, amely a kiindulási szinthez viszonyítva 220%. SZABADALMI IGÉNYPONTOK 1. Eljárás a metanobaktériumos fermentáció B12 -vitamin hozamának növelésére mezofil metántermelő vegyes mikropopulációval, anaerob szeptikus körülmények között, ismert táptalajkomponensek és prekurzorok jelenlétében adott eseten folyamatosan végzett fermentáció útján, azzal jellemezve, hogy a kiinduláshoz használt B12 -vitamint tartalmazó fermentációs közeghez legalább 90% ammóniumnitrogén és legalább 90% metanol-szén 1:10^-1:20, előnyösen 1:11-1:15 arányú ismert táptalajkomponenseket tartalmazó tápoldatot adunk, majd az ammónium-nitrogén és metanol-szén arányának megfelelő Bt2 -vitamin szint elérése után a tápanyagkomponenseket tartalmazó tápoldat legalább 90% ammónium-nitrogén és legalább 90% metanol-szén arányát a metanol-szén javára 1:11—1:21, előnyösen 1:12—l:16-ra növeljük, kívánt esetben naponta a fermentlé mintegy 10%-át, előnyösen két részletben mintegy 20%-át elvesszük, mimellett a fermentléhez azonos térfogatú, a fenti ismert tápanyagkomponenseket tartalmazó tápoldatot adunk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatositási módja, azzal jellemezve, hogy szén- és energiaforrásként metanolt, a nitrogén-forrás 90%-aként ammóniumsókat, valamint a szokásos növekedési faktorokat és prekurzorokat alkalmazzuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 760296, OTH, Budapest
