167655. lajstromszámú szabadalom • Eljárás N-terminálisán alfa-aminooxikarbonsavat tartalmazó, új, ACTH hatású polipeptidek előállítására
19 167655 20 5. lépés Z-GMOBuVAsptOBuVGMOBuVSer-Ala-5,0 g (11,5 mmól) Z-Glu (OBu^-ONSu-t és 6,60 g (11,2 mmól) H-AspíOBu^Glu (OBuVSer -Ala-OBut-t 100 ml kloroformban oldva reagáltatunk. & Másnap a reakcióelegyet háromszor 30 ml n sósavval, és háromszor 30 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal kirázzuk. A kloroformos oldatot szárítás után bepároljuk és a géles maradékot petroléterrel eldörzsöljük. A nyers terméket etilacetátban oldjuk, petroléterrel leválasztjuk, szűrjük, szárítjuk. 8,45 g (83%) védett pentapeptidésztert kapunk; op.: 168-169 C°, R| =0,5, [afD = -29,0° (c= 1, etanol). Elemzés a C4 4 H 6 9 N s 01 5 összegképlet alapján: 15 számított: C 58,2%; H 7,7%; N 7,7%; talált: C 58,4%; H 7,7%;N 7,5%. 6. lépés: H-GMOBuVAsplOBuVGMOBuVSer-Ala-OBu* 20 8,0 g (8,8 mmól) Z-GluíOBu^-Asp (OBuVGlu(OBu^-Ser-Ala-OBut-t 160 ml metanolban oldva, 1,0 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A reakció befejeződése után a 25 katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a géles maradékot éter-petroléter eleggyel szűrőre visszük. 6,40 g pentapeptidésztert kapunk; op.: 136-138 C°, R/= 0,1, [a]D • -29,7° (c = 1, etanol) 7. lépés: Z-Ala-GiulOBu^-Asp -Ala-OBu* (OBu^-GlufOBu^-Ser-9. lépés: Z-Asn-OPFP 1,33 g (5 mmól) Z-Asn -OH-t és' 3,04 g pentafiuorfenoít 3,5 ml DMF-ben oldunk és hozzáadunk 10 30 5,20 g (6,7 mmól) H-GluíOBu^-AspíOBu*)- 35 -GluíOBu1 )- Ser-Ala-OBut-t 2,15 g (6,7 mmól) Z-Ala-ONSu-val 50 ml kloroformban oldva reagáltatunk. A reakcióelegyet másnap háromszor 10 ml n sósavval és háromszor 10 ml 5%-os nátriumhidrogénkarbonát-oldattal kirázzuk. A kloroformos oldatot 40 szárítás után bepároljuk, majd a géles maradékot petroléterrel eldörzsöljük. 6,10 g (93%) védett hexapeptidésztert kapunk; op.: 194-195 C°, R/ = 0,5, [afo = 30,9° (c=l, etanol). 8. lépés: H-Ala-Glu (QBu*)- AsplOBu^-GMOBuVSer-Ala-OBu* 45 6,10 g (6,2 mmól) Z-Ala-Glu (OBu^-AspíOBu*)- 50 GlutOBufySer-Ala-OBut-t 120 ml metanolban feloldunk és 1,0 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük, az oldatot bepároljuk és a kristályos maradékot etanol-éterből 55 átkristályosítjuk. 4,35 g (83%) hexapeptidésztert kapunk; op.: 192-194 C* R/ = 0,25, R/ = 0,1, R£ = 0,65. Elemzés aC39H6 gN 6 0 14 összegképlet alapján: számított: C 55,4%; H 8,1%; N 9,9%; 60 talált:C 55,2%; H 7,8%; N 9,6%. 65 10,5 ml dioxánt, Az oldatot 0 C°-ra hűtjük és keverés közben hozzáadunk 1,13 g (5,5 mmól) DCC-t. Ezután a reakcióelegyet két órán keresztül 0 C°-on keverjük, majd a DCU-t kiszűrjük és a szűrletet csökkentett nyomáson szárazra pároljuk. A maradékot 8 ml éterrel eldolgozzuk és a kristályos fehér anyagot szűrjük, kevés hideg éterrel mossuk. Termelés: 2,02 g (93,5%) Z-Asn-OPFP. Op.: 149-150 C°. Rf7 = 0,35. Elemzés aCi 8 Hi 30 5 N 2 F S összegképlet alapján: számított: C 50,0%; H 3,0%; N 6,5%; találtC 50,2%; H 3,1%; N 6,4%. 10. lépés: Z-Asn-Gly-OBut 0,43 g (1 mmól) Z-Asn-OPFP-t enyhe melegítéssel 10 ml dioxánban oldunk, az oldatot 10 C°-ra hűtjük és 0,185 g (1,1 mmól) H-Gly-OBut .HCl-t adunk hozzá. Ezután a kapott szuszpenzióhoz keverés közben 0,154 ml (1,1 mmól) trietilamint adunk és a reakcióelegyet fél órán keresztül szobahőmérsékleten keverjük, majd szűrés után a kapott oldatot szárazra pároljuk. A géles maradékot éterrel eldolgozva szűrjük, így 0,34 g (89,8%) Z-Asn-Gly-OBu^-t nyerünk. Op.: 150-151 C°, Rf8 = 0,6. Elemzés aCi8H2S 0 6 N3 összegképlet alapján: számított: N 11,1%; talált:Nll,2%. 11. lépés Z-Asn-Gly-OH 9,13 g (26 mmól) Z-Asn-Gly-OBuk 90 ml trifluorecetsavban oldunk és fél órai állás után az oldathoz 450 ml száraz étert adunk. A kivált fehér csapadékot szűrjük, éterrel mossuk. A nyers terméket 35 ml vízből kristályosítva 6,56 g (78%) Z-Asn-Gly-OH-t nyerünk. Op.: 170-172 C°, R/ = 0,45. 12. lépés: Z-Asn-Gly-Ala-Glu (OButj-Asp (OBu*) GMOBu*)-Ser-Ala-OBu1 2,45 g (13,3 mmól) PFPOH-t, 1,31 g (4,02 mmól) Z-Asn-Gly-t és 3,40 g (4,02 mmól) H-Ala-GluíOBU1 ) -AspíOBu^-GluíOBu*) -Ser-Ala-OBuk feloldunk 24 ml vízmentes dimetilformamidban, majd az oldatot 0 C°-ra hűtjük és 0,915 g (4,43 mmól) DCC-t adunk hozzá. A reakcióelegyet fél órán át 0 C°-on, két és fél órán át szobahőmérsékleten keverjük, majd a kivált DCU-t kiszűrjük és az oldatot bepároljuk. A szilárd maradékot etilacetáttal eldörzsöljük és leszűrjük. A nyers terméket 20 ml etüacetáttal kifőzzük és szűrőn kétszer 10 ml forró etilacetáttal mossuk. 4,12 g (89%) védett oktapeptidésztert kapunk; op.: 200-201 C°, R/ = 0,60. 13. lépés: H-Asn-Gly-Ala-Glu (OBu^-AsplOBijt) -GMOBu*;-Ser-Ala-OBu* 4,0 g (3,48 mmól) Z-Asn-Gly-Ala-Glu (OBu^-Asp(OBu^-GluíOBu^-Ser-Ala-OBu^t 140 ml metanolban feloldunk és 0,5 g 10%-os csontszenes palládium katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A Reakció befejeződése után a katalizátort kiszűrjük.az oldatot bepároljuk és a maradékot éterrel eldörzsöljük. 3,40 g (96%) oktapeptidésztert kapunk; op.:" 188-190 C°, R/= 0,5. [a]D = -6,6° (c=0,89, dimetilformamid).
