167630. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vakcina és szérum előállítására sertések és borjak enterális coli-megbetegedései ellen

g 167630 10 tágító hatását 50%-kal, vagy annál nagyobb mértékben csökkentette. Azt találtuk, hogy a szérumok a hőálló enterotoxinok szegment tágító hatását csökkentették. Ezzel szemben a negatív szérum ilyen hatással nem rendelkezett. Hasonló eredményre jutottunk más eredetű negatív szérumainkkal is. Bizonyítva látjuk tehát, hogy a toxint neutralizáló ellenanyag a hiperimmunizáló oltások hatására keletkezett. Vizsgálataink egyik fontos része annak eldöntésére 10 irányult, hogy a különböző szerológiai típusokba tartozó, tehát egymással antigénszerkezeti rokonságban nem lévő enteropatogén colitörzsek immunbiológiailag azonos enteroxinokat termelnek—e? Azt tapasztaltuk, hogy szérumaink az eltérő szerológiai típusokban tartozó törzsekkel termelt ST enterotoxinok szegment tágító hatását vagy teljesen megszüntették vagy lényeges mértékben csökkentették. Ezek alapján úgy látjuk, hogy a savó entero- „„ toxin elleni hatóanyagai a más szerológiai típusba tartozó törzsek ST enterotoxinjait semlegesíteni képesek, ez pedig az enterotoxinok immunbiológiai szempontból vett azonosságára utal. Más szóval egy jó anti-enterotoxikus szérum képes az enterotoxin káros JC

. hatását kivédeni függetlenül attól, hogy a törzs milyen szerológiai típusba tartozik. Ebből következik, hogy az enterotoxint tartalmazó vakcina képes anti-enterotoxikus ellenanyagok kialakítására. Ezek alapján a járvány folyamán fellépő szerológiai típusváltás 3Q nem függeszti fel az anti-enterotoxin védelmet. Ennek a ténynek a betegség elleni védekezésben meghatározó szerepe van: a találmány lényege is ezen az elven alapul. Hőérzékeny enterotoxinokkal végzett vizsgálataink 35 azt bizonyítják, hogy a homológ szérum a hőérzékeny. enterotoxinok szegment tágító hatását teljesen megszüntette. A szérumokban tehát LT enterotoxinok ellen ható semlegesítő anyagok voltak. Azt találtuk, hogy a kísérlethez felhasznált, találmány szerinti 40 eljárással előállított szérum az eltérő szerológiai típusba tartozó (0149) törzs által termelt LT enterotoxint is teljes mértékben hatástalanította. Ezek alapján feltételezzük, hogy az LT enterotoxinok ellen termelt szérum nem csupán a homológ enterotoxint 45 képes hatástalanítani, hanem az eltérő szerológiai típusba tartozó törzsek enterotoxinját is semlegesíti. Ezekből az adatokból az ST enterotoxinokkal végzett kisérleteinkhez hasonlóan azt a következtetést vonhatjuk le, hogy az LT enterotoxint tartalmazó 50 vakcina képes anti-enterotoxikus ellenanyagok termelését kiváltani, a termelődött ellenanyagok pedig a betegséget okozó törzs szerológiai típusától függetlenül a coli -LT-enterotoxin elleni védelem kialakítására képesek. 55 Vizsgálataink során érdekelt bennünket az is, hogy a találmány szerinti eljárással termelt szérumok képesek-e az enteropatogén E.coli törzsek élő tenyészeteinek szegment tágító hatását kivédeni? E vizsgálataink eredményét a 2. táblázatban foglaltuk össze. Vizsgálatainkkal kapcsolatban hivatkozunk Smith és Gyles (J.Med.Microb. 1970. 3_, 387), közlésére, amely szerint az ST enterotoxint nem tartalmazó coli-tenyészettel előállított szérumok csak a homológ törzsek élő tenyészeteinek szegment tágító hatását védik ki. E. coli élő tenyészetével végzett neutralizációs próbák | II. táblázat Bélkacsba bevitt A lekötött bélkacs válasza anyagok Neutralizációs Index hatás 0149 élő tenyészet 4.00 5x105 csíra 0149 élő tenyészet + 0,76 5x10*> csíra+homológ antiszérum 0149 élő tenyészet 5x104

csíra 3,16 0149 élő tenyészet 5x 104 csíra+homológ antiszérum + 0,40 0149 élő tenyészet 5x105

csíra 5,40 0149 élő tenyészet 5x105

csíra+0138 + 0,58 antiszérum Smith és Gyles közlésével szemben, mint ahogy a fenti táblázatból látható, a találmány szerinti eljárással előállított két különböző szerológiai típusba tartozó törzzsel termelt szérum egyaránt kivédte az 0149 enteropatogén törzs élő tenyészetének szegment tágító hatását. Megvizsgáltuk a formaiinnak az oltóanyagra kifejtett hatását. A steril próbák során az oltóanyag minták sterilnek bizonyultak. Ez arra utal, hogy a bevitt formaldehid az élő baktériumokat elölte. A formaldehidnek egymagában is szegment tágító hatása van. Az ST enterotoxin nem dializálható, szegment tágító képességét a dialízis után megtartotta. A formaldehidről ismeretes, hogy dializálható, tehát kísérletünkben az anyagból eltávozott. A dializáló hártyában maradt ST enterotoxin szegment tágító képessége komoly mértékben csökkent. Ebből következik, hogy a formaldehides kezelés az enterotoxin molekulákat nagy mértékben méregtelenítette, vagyis enterotoxoiddá alakította át, ellenkező esetben a formaldehidtől megszabadított ST enterotoxin a szegmentet tágította volna. Az oltóanyagban tehát méregtelenített, enterotoxoiddá átalakult hőálló enterotoxin található. Ez a tény az oltóanyag ártalmatlansága szempontjából kedvező. Szopósmalacok per os kezelésekor az alábbi eredményeket kaptuk. Öt kocától származó 42 darab, 24-72 órát élt szopósmalacnak szájon át, szonda segítségével enterotoxinokat, enterotoxin-szérumkeverékeket és kontrollként E. coli levestenyészeteket adtunk és az állatokat az anyjuk alatt hagytuk. E kísérletek során azt vizsgáltuk, hogy (a) a találmány szerinti eljárással termelt ST (hőálló) és LT (hőérzékeny) enterotoxin készítmények - amellett, hogy a bélkacspróbában pozitívan reagálnak — képesek-e szopósmalacokban hasmenést előidézni; (b) találmány szerinti eljárással termelt vérsavó az enterotoxinok hasmenést okozó hatását kivédi-e; (c) a kísérletben szereplő malacok egyrésze 0141 törzzsel készült vakcinával oltott kocáktól származott, és azt kívántuk eldönteni, hogy az oltott kocák malacai rendelkeznek-e olyan mértékű, anyjuktól kapott védettséggel, amely az ST és LT enterotoxin hasmenést okozó hatását semlegesíti; 5