167616. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vírusellenes hatású komplex előállítására
3 167616 • gok, mint maglisztek, például gyapotmagliszt, kukoricalekvár, húskivonat, élesztőkivonat, pepton, karbamid vagy az említett anyagok különféle elegyei. A nitrogénforrást általában olyan mennyiségben alkalmazzuk, hogy a tápközegben elemi nitrogénre számítva 0,001%-1,0%, előnyösen 0,01%-0,5% nitrogén legyen jelen. A tápközegben rendszerint alkalmazunk kisebb mennyiségben a mikroorganizmusok anyagcseréje szempontjából lényeges elemeket is, mint foszfort (például kálium-düúdrogén-foszfát vagy diammónium-hidrogén-foszfát alakjában), magnéziumot (például magnézium-szulfát vagy magnézium-karbonát alakjában), ként (például valamely szulfát alakjában) és káliumot (például kálium-klorid vagy kálium-karbonát alakjában), valamint csekély mennyiségben úgynevezett nyomelemeket, mint vasat, mangánt, cinket, molibdént és/vagy rezet is. A találmány szerinti eljárásban alkalmazható vizes tápközegek példáiként az ismert ilyenfajta tápközegeket, mint a Czapek-Dox tápközeget említjük. A mikroorganizmus tenyésztése 15 C és 35 °C közötti, előnyösen 25 °C körüli hőmérsékleten történhet. A termelt hatóanyag extrahálására alkalmas, vízzel lényegileg nem elegyedő szerves oldószerek példáiként a kloroform, etilacetát, toluol és dietil-éter említhetők; ezek közül különösen a kloroform bizonyult előnyösnek. Azt találtuk, hogy a találmány szerinti eljárással termelt vírusellenes hatóanyag nem egységes vegyület, hanem nyolc új, önmagában is vírusellenes hatású vegyületet tartalmaz. A találmány szerinti eljárással, a Sirodesmium diversum mikroorganizmussal lefolytatott fermentáció levének szűrletéből kinyert vírusellenes hatású szerből ez a nyolc új vírusellenes hatású vegyület elkülöníthető; e vegyületeknek az A-, B-, C-, D-, E-, F-, G és H-szirodezmin elnevezést adtuk. Az A-szirodezmin kémiai szerkezetét a csatolt rajz szerinti (I) általános képlet szemlélteti; e képletben az A-szirodezmin esetében R2 hidrogénatomot képvisel és n = 2. Az (I) általános képlet a vegyület viszonylagos sztereokémiái szerkezetét is szemlélteti. A B-szirodezmin szintén az (I) általános képletnek megfelelő szerkezetű; ebben az esetben R2 hidrogénatomot képvisel és n = 4. Ugyancsak az (I) általános képletnek megfelelő kémiai szerkezetet mutat a C-szirodezmin is; itt R2 hidrogénatomot képvisel és n = 3. Ez a három vegyület, az A-, B- és C-szirodezmin epi-(n)-tiadioxo- piperazin-gyűrűrendszert tartalmaz. Ismeretesek már más hasonló, ugyancsak epi-(n)-tiadioxo-piperazin -gyűrűrendszert tartalmazó molekulájú, vírusellenes hatású vegyületek is, mint például az aranotin és apoaranotin (1 238 327 sz. nagy-britanniai szabadalmi leírás) továbbá a gliotoxin (J. Am. Chem. Soc. jiO, 1001, 1958); ezek az ismert vegyületek azonban részint kevésbé aktívak a találmány szerinti új vegyületeknél, részint pedig terápiás arányuk kisebb az új vegyületeknél. A találmány szerint előállított vírusellenes hatású szer kéndioxiddal való kezelése útján egy további új, szintén vírusellenes hatású származékhoz, a J-szirodezmin vegyülethez jutunk. Ennek előállítása ugyancsak a találmány körébe tartozik. A találmány szerinti eljárással előállítható új vírusellenes hatású vegyületek, az A-, B-, C-, D-, E-, F-, G-, H- és J-szirodezmin az alábbi jellemző tulajdonságaik alapján azonosíthatók; A-szirodezmin: Tapasztalati képlet: C20 H 26 N 2 0 8 S 2 r IfiTTl 76 SÍ 3Q3tok" 5 számított C: 49,4%; H: 5,4%; N: 5,8%; S: 13,2% talált: C: 49,7%; H: 5,4%; N: 5,8%; S: 12,8%. Tömegspektrum: Primer ion nem látható, de erős csúcs mutatkozik (M-Sa ) e -nél. Talált m/e érték 422,1731; számított érték a C20 H 26 N 2 O 8 képlet 10 alapján: 422,1689. Trimetil-szilil- imidazollal (benzolban, 60 °C-on három óra alatt) történő szililezés útján a bisz-trimetilszilil-származék képződik. E származék tömegspektrumában sem mutatkozik primer ion, hanem (M-CH3 )®-nek megfelelő gyenge csúcs látható 615,1689 m/e értéknél; számított érték aC25 H39 N2 0 8 S 2 Si 2 képlet alapján: 615,1686. Acetilezés: Ha az A-szirodezmint ecetsavanhidriddel reagáltatjuk (piridinben, 22 °C hőmérsékleten, 1 2Q heti reakcióidővel), akkor a 186-189 °C-on olvadó bisz-acetátot kapjuk. Elemzési adatai: aC2 4H 30 N 2 Oi 0 S 2 képlet alapján számított C: 50,7%; H: 5,2%; N: 4,9%; talált C: 50,5%; H: 5,3%; N: 4,9%. 25 Tömegspektrum: Legnagyobb csúcs (M—S 2 ) ffi 506,1871 m/e értéknél; a C2 4H 3 oN 2 Oio képlet alapján számított m/e: 506,1901. Ha az A-szirodezmint piridinben, 22 °C hőmérsékleten egy óra hosszat reagáltatjuk ecetsavanhidriddel, 30 akkor a monoacetátot kapjuk. Ennek elemzési adatai: aC22 H 28 N 2 0 9 S 2 képlet alapján számított C: 50,0%; H: 5,3%; N: 5,2%; S: 12,1%; talált C: 49,9%; H: 5,3%; N: 5,3%; S: 11,7%. Tömegspektrum: Kis csúcsérték (M—S)®-nek meg„5 felelően, 496 m/e értéknél és erős csúcsérték (M-S2 ) e -nek megfelelően, 464 m/e értéknél. Az A-szirodezmin 0,1 n metanolos hidrogén-klorid-oldattal történő hidrolízise útján dezacetil-A-szirodezmint kapunk, op.: 198—201 °C. Elemzés: a 4f) C 18 H 2 4N 2 0 7 S 2 képlet alapján számított C: 48,8%; H: 5,6%; N: 6,3%; S: 14,4%; talált C: 48,4%; H: 5,6%; N: 6,0%; S: 14,3%. Tömegspektrum: Primer ion nem látható, eiős csúcs (M—S2 ) e -nek megfelelően 380 m/e értéknél. 42 Az A-szirodezmin trifenil-foszfinnal kloroformban történő reagáltatása útján egy monoszulfid-származékot kapunk; elemzési adatai: a C20 H 26 N 2 O 8 S képlet alapján számított C: 52,9; H: 5,8; N: 6,2; S: 7,0% 50 talált C: 52,7; H: 5,7; N: 5,8; S: 7,1%. Tömegspektrum: Molekuláris ion látható a 454 m/e értéknél. B-szirodezmin: 55 Tapasztalati képlet: C20 H 26 N 2 0 8 S 4 Elemzési adatok: a fenti képlet alapján számított C: 43,6%; H: 4,8%; N: 5,1%; S: 23,3%; talált C: 43,4%; H: 4,9%; N: 4,9%; S: 22,8%. Tömegspektrum: Primer ion nem látható, de erős 60 csúcs mutatkozik (M-S 4 )®-nek megfelelően 422 m/e értéknél. A tömegspektrum lényegileg megegyezik az A-szirodezminével. Szililezés (bisz-trimetilszilil- trifluor-acetamiddal, 65 benzolban, 50 °C-on, 3 óra alatt) a bisz-trimetilszililszármazékot kapjuk. Ennek tömegspektrumában sem mutatkozik primer ion, de gyenge csúcs látható 2
