167614. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-helyettesített 1,2-4-triazol-pentofuranozidok előállítására
15 167614 16 25 C° hőmérsékleten tartjuk. Az oldószert ezután elpárologtatjuk és a maradékot szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. Etilacetát és metanol 9:1 arányú elegyével eluálunk, ily módon 250 mg l-(2-dezoxi-0-D- ribofuranozil)- 1,2,4-triazol- 3-karboxamidot (az elméleti hozam 80,8%-a) kapunk amorf szilárd termék alakjában. Elemzési adatok a G*H12 N 4 04 képlet alapján: számított: C: 42,10%, H: 5,30%, N: 24,55%: talált:C: 41,86%, H: 5,12%, N: 24,49%. D) 1-(2-dezoxi- a-D- ribofuranozil)- 1,2,4-triazol- 3-karboxamid előállítása. 780 mg (1,63 millimól) l-(2-dezoxi- 3,5-di- O-ptoluil- a-D-ribofuranozil)- 1,2,4-triazol- 3-karbonsavmetüésztert 25 ml O C° hőmérsékleten előzetesen vízmentes ammóniával telített metanolban oldunk, majd az oldatot lezárt nyomásálló edényben 3 napig 25 C° hőmérsékleten tartjuk. Az oldószert ezután elpárologtatjuk és a kapott nyers terméket szilikagél-oszlopon kromatografáljuk. Etilacetát és metanol 9:1 arányú elegyével aluálunk; ily módon 350 mg l-(2-dezoxi- a-D- ribofuranozil)- 1,2,4-triazol- 3-karboxamidot (az elméleti hozam 94,4%-a) kapunk amorf szilárd termék alakjában. Elemzési adatok a C8 Hi 2 N 4 04 képlet alapján: számított: C: 42,10%, H: 5,30%, N: 24,55%; talált:C: 41,88%, H: 5,48%, N: 24,29%. Ugyanazzal az eljárással, amellyé1 a metilésztereket a megfelelő karboxamidokká alakítottuk át, a fenti példa B) szakaszában leírt módon kapott metilészteranomer- elegyet is közvetlenül reagáltathatjuk ammóniával: ily módon a karboxamid a- és (3-anomerjének elegyét kapjuk. 16. példa A találmány szerinti eljárással előállított új vírusellenes hatóanyagokat különféle vírusok elleni hatásosságuk szempontjából vizsgáltuk a szokásos módszerekkel. Ennek során mind DNS-, mind pedig RNS-típusú kis és nagy vírusokat vizsgáltunk, a Sidwell és munkatársai [Appl. Microbiol, 22, 797 (1971)] vírus-számlálási módszerrel. Az e módszerrel kapott VR-érték mutatja a vírusellenes aktivitás mértékét, mimellett 1,0 feletti értékek határozott vírusellenes aktivitást mutatnak, 0,5 és 0,9 közötti értékek a vegyület mérsékelt vírusellenes aktivitását mutatják, a 0,5 alatti értékek esetében viszont vírusellenes aktivitás 10 15 20 alig van vagy egyáltalán nincs. A kapott eredményeket az alábbi táblázatban foglaltuk össze. Összehasonlításul megadtuk különféle ismert vírusellenes szerek (5—IDU, Ara-C és Ara-A) alkalmazásával kapott eredményeinket is. Ezeket az eredményeket Microtest II műanyag-lemezeken (a Falcon Plastics cég készítménye) lefolytatott kísérletek során kaptuk, KB, emberi pharynx-carcinoma- vagy RK13, nyúlvese-sejtek egysejtes rétegével. A kísérletek során alkalmazott vírusok közül az 1 típusú herpes-virus a herpes labialis, herpes keratitis és herpes encephalitis okozója, míg a 2 típusú herpes-vírus a gyakori fertőző alakú nemi betegségnek, a herpes genitalisnak a korokozója. A Myxoma vírus házi és vad nyulak légzési zavarokkal és daganatok képződésével járó, elhullással végződő megbetegedését okozza. A Pseudorabies vírus fertőző paralízises megbetegedéseket okoz szarvasmarhákon, sertéseken és kutyákon. A parainfluenza vírus embereken különösen gyermekeken okoz enyhe lefolyású megbetegedést a felső légutakban, emellett a szarvasmarhák conjunctivitismegbetegedésében is szerepet játszik. A kísérletekben alkalmazott Vaccinia vírus a közönséges himlő-vírusnak egy a himlő-oltáshoz alkalmazott aNV rulens alakja; ez a vírus az oltások alkalmával olykor 25 nem kívánatos mellékhatásokat okoz. A 13 típusú Rhino-vírus a közönséges nátha okozásában közreműködő számos különféle vírusok egyike. A táblázatban szereplő 1. sz. vegyületet nyulakon és hörcsögökön is vizsgáltuk; ez a vegyület nem-toxi-30 kus adagokban határozott hatást mutat a herpes simplex vírus által okozott HSV-keratitis ellen. A vegyület a HSV vírussal az egerek farkán történő helyi fertőzés esetén kiváltott tüneteket hatásosan gátolja. Vizsgáltuk ezt a vegyületet egéren is A2 influenza-vírus, B influenza-vírus és 1 típusú parainfluenza vírus ellen; ezekben a kísérletekben is határozott vírusellenes hatást mutatott e vegyület. Amint a táblázat adataiból látható, ez a vegyület lényegesen szélesebb vírusellenes hatást-spektrumot mutat, mint az ismert 5-IDU, Ara-A és Ara-C vírusellenes szerek bármelyike. Emellett azt tapasztaltuk, hogy az l-(0-D- ribofuranozil)- 1,2,4-triazol- 3-karboxamid hatásosan gátolja a Pseudomonas aeruginosa baktérium, valamint a Candida albicans és Cryptococ-45 cus diffluens gombák fejlődését. A táblázatban felsorolt valamennyi új vegyület (az 1.—6. sz. vegyületek ) vizes közegekben jól oldódik; valamennyi vegyület csekély citotoxikus hatást mutatott. 35 40 I. táblázat Viszonylagos vírusellenes aktivitás Sz. Vegyület Herpes 1-típus VR Herpes Myxoma Pseudo2-típus rabies VR VR Vr Vaccinia Adeno Pára- Rhino influenza 13-típus VR VR VR VR 1. l-(/3-D-ribofuranozil)l,2,4-triazol-3-karboxamid 2. l-((3-D-ribofuranozil> -1,2,4-triazol-3-karboxamid-5 '-foszfát-ammóniumsó 1,5 1,0 1,2 0,7 0,8 1,3 0,9 1,7 0,0 1,0 0,5 1,0 0,0 0,9 0,5 1,0 0,8 — — • 0,5 0,0 0,5 0,5 0,3
