167605. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóanyag előállítására fehérjék számára
167605 umnitritet, majd 20 térfogat %-os h% sósavat adunk hozzá pH = 1-2 érték eléréséig. A reakcióelegyet 10 percen át 0 C°-on keverjük, majd a pH-t n nátriumhidroxid-oldattal 5-re állítjuk be és a felső folyadékot dekantáljuk. A maradékot sósavval pH = 4-5 értékre beállított jéghideg vízzel többször mossuk, míg a felül elhelyezkedő folyadék dekantáláskor színtelenné válik. Az ily módon kapott részecskéket közvetlenül felhasználjuk az enzim megkötéshez. Aoterméket 6,5 pH-jú foszfát-pufferben 24 órán át 4 C°-on tárolva a megkötési kapacitás észrevehető mértékben nem csökken. A fenti eljárással analóg módon porózus üveg (részecskenagyság: 40-200 mesh, USA szabvány, szemcsenagyság: 10-220 nra) alumíniumoxid, cellulóz és poliamid felhasználásával további hordozó-10 15 anyagokat állítunk elő. Az alumíniumoxid, cellulóz, üveg és poliamid kezelését az előző bekezdésben leírtak szerint végezzük el. 2. példa 1 g, az 1. példa szerint előállított hordozóanyagot 25 ml jéghideg enzim-oldathoz (lásd táblázat) adunk 0,05 mólos 6,5-7,8 H-jú foszfát-pufferben (fehérjetartalom 1-8 mg) és 4 C°-on 0,5-20 órán át enyhén rázogatjuk. Az elegyet szűrjük, a részecskéket 3x50 ml 1 mólos káliumklorid-oldattal mossuk, 20 ml 0,05 mólos 6,5 pH-jú citrát-pufferben vagy foszfát-pufferben szuszpendáljuk és 4 Cc -on tároljuk. Az ily módon kapott enzim-készítmények aktivitását az alábbi táblázatban tüntetjük fel. Táblázat Hordozó alap: porózus üveg Enzim Bemért enzim-mennyiség mg fehérje egység Aktivitás pro g hordozó Szubsztrátum Naringináz 1 2,3 3.4 8 1,9 2,4 Naringin Amtloglükozidáz 4 8 192 384 50 90 Keményítő Hesperidináz 2 10,4 4,6 Hesperidin-dihidrokalkon Ficin 2 1,2 0,38 Kazein Tripszin 2,5 5,5 1,9 N-Benzoil- dl-arginin -4-nitroanilid Bromalin 2 1,1 0,32 Kazein /3-Glükozidáz 2 8' 8 2,3 N-Nitro-fenil-glükopiranozid Hordozó alap: szilikagél Naringináz 3 10 1,8 Amiioglükozidáz 2 90 9,4 Tripszin 2,5 5,5 2,1 lásd fent Ficin 2 1,2 0,44 Bromalin 2 1,1 0,35 ß-Glükozidaz 2 8,8 1,76 3.1 oélda 45 Denel szerint Helv. Chim. Acta 35 . 115 (19 1 g cellulózt (gyapotszálak) 200 mg 4,4'-diaminodifenilmetánnak 10 ml vízmentes benzollal képezett oldatához adunk. Az elegyet 5 percen át időnkénti 50 rázogatás közben 80 C°-os vízfürdőn melegítjük, majd a benzol teljes eltávolításig vákuumban leszivatjuk. Az Ily módon diaminnal kezelt gyapotszálakat 20 ml jéghideg vízhez adjuk és rázogatás közben előbb 300 mg nátriumnitritet adunk hozzá majd a pH-t híg (20 55 térfogat %-os) sósavval 1-2-re állítjuk be. A reakcióelegyet további 10 percen át keverjük, majd a felső részt dekantáljuk. A maradékot jéghideg vízzel többször mossuk. Az ily módon előkészített gyapotszálakat közvetlenül felhasználjuk enzimek megkötésére. 60 meghatározva] adunk 25 ml jéghideg 0,05 mólos pH = 6,5 foszfátpuff erben. Az elegyet 1 órán át 4 C -on rázatjuk, majd szűrjük és a maradékot 1 mólos káliumklorid-oldattal és a pufferrel mossuk. A cellulózhoz kötött heszperidináz aktivitása 1,9 egység/g cellulóz. 4. példa 1 g, a 3. példa szerint aktivált cellulózt 2 mg 65 heszperidinázhoz [10,4 aktivitási egység, heszperidin-dihidrokalkon szubsztrátumon Borel, Hostetter és 2 5. példa 1 g kromatografálási célokra alkalmas alumíniumoxidot (Woelm-Eschwege) 200 mg 4,4'-diamino-difenilmetán és 10 ml vízmentes benzol oldatához adunk. Az elegyet 5 percen át időnkénti rázogatás közben vízfürdőn (80 C°) melegítjük, majd a benzol teljes mennyiségének eltávolításáig vákuumban leszívatjuk. Az aromás diaminnal fly módon kezelt alumíniumoxid-részecskéket 20 ml jéghideg vízhez adjuk, majd keverés közben előbb 300 mg nátriumnitritet adunk hozzá és utána a pH-t híg 20 térfogat %-os sósavval 1-2-re állítjuk be. Az elegyet további
