167530. lajstromszámú szabadalom • Eljárás xilosztaszin előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS Bejelentés napja: 1973. VII. 20. (TA-1265) Közzététel napja: 1975. V. 28. Megjelent: 1976.X. 30. 167530 Nemzetközi osztályozás: C 12 d 9/20, C 07 c 47/18 Feltalálók: Hoiii Satoshi, Osaka, Nogami Ikuo, Kyoto, Hasegawa Toru, Hyogo, Yoneda Masahiko, Kobe, Japán Tulajdonos: Takeda Chemical Industries, Ltd., Osaka, Japán Eljárás xilosztaszin előállítására 1 A találmány tárgya eljárás az I. képleten bemutatott 0-j3-D-xilofuranózil-(l->5)-0-[a-2,6-diamino-2,6-didezoxi-D-glükopiranozil-(l->-4)]-2--dezoxisztreptamin (xilosztaszin) előállítására. 5 A 158 163 sz. magyar szabadalmi leírás butirozin A előállítását ismerteti, mely vegyület a xilosztaszinnál egy 4-amino-2-hidroxibutiril-csoporttal többet tartalmaz. A 2 104 129 sz. Német Szövetségi Köztársaság-beli nyilvánosságrahozatali irat 10 az SF-733 vegyületet ismerteti, amely a xilosztaszin izomerjének tekinthető, mivel a xilóz helyett ribózt tartalmaz. E vegyületnél a xilosztaszin lényegesen kisebb koncentrációban hatásosabb Serratia marcescens-szel szemben. 15 A találmány szerinti eljárás értelmében a xilosztaszin és gyógyászati szempontból elfogadható sói előállítására úgy járunk el, hogy egy, a Bacillus nembe tartozó mikroorganizmust tenyésztünk, majd a tenyészléből elkülönítjük a hatóanyagot. 20 Részletesebben, a xilosztaszin előállítására a találmány szerinti eljárás előnyös kivitelezési változata szerint úgy járunk el, hogy felhasználható szénforrásokat, emészthető nitrogénforrásokat és más, a termelő mikroorganizmus növekedéséhez 25 szükséges tápanyagokat tartalmazó táptalajon addig tenyésztünk egy, a Bacillus nembe tartozó, xilosztaszint termelő organizmust, míg a tenyészlében xilosztaszin halmozódik fel, amelyet ezután elkülönítünk a tenyészléből. 30 A találmány szerinti eljárás értelmében xilosztaszint termelő törzsként bármely olyan, a Bacillus nemhez tartozó törzset használhatunk, amely képes ezt , a vegyületet szintetizálni. Ez a mikroorganizmus lehet konstitutív vagy induktív mutáns. Annak eldöntésére, hogy egy mikroorganizmus szintetizál-e xilosztaszint, például a következő szűrővizsgálatot végezzük el. A természetes forrásokból vagy törzsgyűjteményekből származó Bacillus törzsekkel glükóz-bouillon táptalajt oltunk, majd 28 C° hőmérsékleten 3—4 napon át rázatjuk a tenyészetet. Abban az esetben, ha tenyészlé megfelelő tesztorganizmusokkal, például Bacillus subtilis-szel, Escherichia coli-val vagy Staphylococcus aureus-szal szemben hatásos hatóanyagot tartalmaz, szűrjük a tenyészlét. 20 ml szűrlet pH-ját egy bázissal 9 és 10 közötti értékre állítjuk be, majd 0,2 g aktív szénből készült oszlopon kromatografáljuk. Az oszlopot 10 ml vízzel mossuk, majd a hatóanyagot 10 ml 0,1 normál hidrogénklorid oldattal eluáljuk. Az eluátum pH-ját semleges értékre állítjuk be és csökkentett nyomáson desztilláljuk. A desztillációs maradékot Whatman No. 1 (W. and R. Balston Co., USA) szűrőpapírt és borát-puffert (pH 9,5, 0,025 mól) használva papír-elektroforézissel, 2KV/36 cm feszültségkülönbség mellett 90 percen át vizsgáljuk. A xilosztaszinnak megfelelő helyet vagy például Bacillus subtilis tesztorganizmussal 167530