167528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G-418, verdamicin I, sziszomicin és gentamicin A antibiotikumokat tartalmazó keverék és alkotórészei előállítására

33 Az oszlopon szétválasztott antibiotikumok oszlása a következő: Frakciók Antibiotikumok 1—65. hatástalan szervellen anyagok 66—87. verdamicin I 88-91. sziszomicin 119-259. G-418 antibiotikum 259- végig visszamaradt gentamicin A 7. példa Verdamicin I-szulfát előállítása A 6. példa szerint előállított 500 mg verdamicin I-et 90 ml vízben oldjuk, az oldat pH-ját híg kénsavval 4,5-re állítjuk be, és 1 -2 g aktív szénnel 30 percig keverjük, rnajd ""szűrőn elválasztjuk. A szüredéket vákuumbari • 10 ml-re bepároljuk, és keverés közben 100 ml metanolba öntjük. A keletkezett szuszpenziót szűrőre visszük, a szilárd terméket friss metanollal mossuk, és megszárítva 450 mg verdamicin I-szulfátot kapunk. 8. példa Verdamicin I-hidroklorid előállítása A 6. példa szerint előállított 400 mg verdamicin I-et 75 ml vízben oldjuk, és az oldat pH-ját híg sósavval 4,5-re állítjuk be. Az oldatot 1-2 g aktív szénnel 30 percig keverjük, majd leszűrjük. A szüredéket vákuumban 75 ml-re bepároljuk, és keverés közben 150 ml metanol és aceton 1 : 2 térfogatarányú elegyébe öntjük. A keletkezett szuszpenziót szűrőre visszük, a szilárd terméket friss acetonnal mossuk, és megszárítva 300 mg verdamicin I-hidrokloridot kapunk. Ez az eljárás általánosan alkalmazható, és a már említett savak egyenértékű mennyiségével hatékonyságuk tekintetében a verdamicin I-hidrokloriddal és a verdamicin I-szulfáttal egyenértékű más nem toxikus savaddíciós sók készítésére hasz- 50 nálható. 9. példa Verdamicin I bázis előállítása A 7. példa szerint előállított 390 g verdamicin I-szulfátot 10 ml vízben oldjuk. 25 cm magas és 2 cm külső átmérőjű Amberlite IRA-401S 60 ioncserélő oszlopot készítünk. Az antibiotikum oldatát az oszlopra töltjük, és ionmentesített vízzel addig eluáljuk, amíg az eluátum ninhidrinre negatívvá nem válik. Az eluátumot 25 ml-re bepárolva és liofilizálva 230 mg verdamicin I-et kapunk. 65 167528 34 10. példa Az antibiotikum továbbtisztítása 5 G-418-szulfát antibiotikum előállítása 2,6 g 6. példa szerint kapott G418 antibiotikumot 250 ml vízben oldunk, az oldat pH-ját híg kénsawal beállítjuk 4,2-re, majd 5 g aktív szenet 10 hozzáadva egy óra hosszat szobahőmérsékleten keverjük. A szuszpenziót szűrőre visszük, és a szüredéket vákuumban bepároljuk. A maradékot 20 ml vízben oldjuk, és az oldatot élénk keverés közben 500 ml metanolhoz csepegtetjük. A kapott 15 szuszpenziót szűréssel elválasztjuk, a szilárd terméket metanollal mossuk, és 40 C°-on vákuumban szárítva 3,36 g G-418-szulfátot kapunk. Titere 700 Mg/mg. 20 A kénsavat egyenértékű mennyiségű más szerves vagy szervetlen savval helyettesítve és a kicsapásra például acetont használva analóg módon egyéb savaddíciós sók is előállíthatók. 25 Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás az új verdamicin I és G-418 antibiotikumokat és az ismert gentamicin A és szi-30 szomicin antibiotikumokat tartalmazó antibiotikus hatású új keverék és alkotórészei szabad állapotban vagy a verdamicin I vagy G-418 antibiotikumok, vagy a közülük egyet vagy mindkettőt tartalmazó keverékek farmakológiailag elfogadható sói alak-35 jában való előállítására azzal jellemezve, hogy az eddig nem ismert Micromonospora grisea mikroorganizmus-faj egy, a fent megnevezett négy antibiotikumot termelő törzsét, előnyösen az NRRL 3800 jelű törzset asszimilálható szén- és nitrogénforrást tartalmazó táptalaj felületén vagy a táptalajba süllyesztve aerób körülmények között tenyésztjük, majd az antibiotikum-keveréket a fermentléből és kívánt esetben az alkotórészeket egymástól elkülönítjük, és kívánt esetben tisztítjuk, és kívánt esetben egy így kapott terméket, ha az verdamicin I és/vagy G-418 antibiotikumból áll, vagy ezeket tartalmazza, átalakítunk farmakológiailag elfogadható sójává. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tenyésztést süllyesztve végezzük. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tenyésztést 20 és 40 C°, előnyösen 28 és 35 C° közötti hőmérsékleten végezzük, és a közeg pH-ját 6,5 és 8,5, előnyösen 7,2 és 8,3 között tartjuk. 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja azzal jellemezve, hogy a tenyésztést szervetlen sók, előnyösen vízben oldható magnézium-, vas- és kobaltsók jelenlétében végezzük. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás foganatosítási módja az antibiotikum-keverék