167528. lajstromszámú szabadalom • Eljárás G-418, verdamicin I, sziszomicin és gentamicin A antibiotikumokat tartalmazó keverék és alkotórészei előállítására

21 167528 22 11. táblázat Oldhatóság Oldószer Verdamicin I Verdamicin I-szulfát G-418 G-418-szulfát metanol kevéssé oldódik oldhatatlan kevéssé oldódik oldhatatlan kloroform kevéssé oldódik nagyon kevéssé oldódik nagyon kevéssé oldódik nagyon kevéssé oldódik benzol nagyon kevéssé oldódik oldhatatlan oldhatatlan oldhatatlan A G-418 antibiotikum mikrobiológiai 15 vizsgálata Ezt a próbát Difco 5. számú antibiotikum táptalajú lemezen a szokásos korongpróbával Bacillus subtilis ATCC 6633 mikroorganizmussal vé- 20 geztük. A próba fizikai körülményei azonosak a Medical Encyclopedia Incorporated (1955) kiadásában megjelent Grove és Randall: „Assay Methods of Antibiotics" című műben közöltekkel. A próbát 1000 Mg/mg titerű G-418 antibiotikum szabványos 25 készítményével összehasonlítva végeztük. A szabványos készítmény egy mikrogrammja a próbában 16,5 ±1,5 mm gátolt zónát képez. A szabványos antibiotikum bázissal összehasonlítva a szabványos antibiotikum-szulfát titere 750 Mg/mg. 30 Verdamicin I és a Micromonospora grisea által termelt többi antibiotikum mikrobiológiai 35 vizsgálata Ezeknek az antibiotikumoknak mikrobiológiai vizsgálatára Staphylococcus aureus ATCC 6538P mikroorganizmussal szemben agar lemezen végzett 40 korongpróbát használtunk. A próbában alkalmazott fizikai körülmények hasonlók a gentamicin vizsgálatára közöltekkel (Oden és munkatársai, „Antimicrobial Agents and Chemotherapy", 1963, American Society for Microbiology). A szabványos 45 verdamicin I bázis titere 1000 |Ug/mg. A próba körülményei között a szabványos készítmény egy mikrogrammja 17,0 ±1,3 mm gátolt zónát képez. A gentamicin próbában a verdamicin I bázis titere 1000/zg/mg volt, és a verdamicin adag-hatásgörbéje 50 párhuzamos menetű a gentamicinével. A gentamicin próbában a verdamicin I-szulfát titere 674jig/mg-nak és saját bázisával összehasonlítva 695 Atg/mg-nak határozható meg. 55 Sók A találmány szerinti antibiotikumok, nevezetesen a verdamicin I és G-418 bázisok, és szerves és szervetlen savakkal savaddíciós sókat képeznek. 60 Dyen savak a kénsav, sósav, foszforsav, toluol-p-szulfonsav, . borostyánkősav, maleinsav, ecetsav, propionsav, ciklopropánkarbonsav, adamantánkarbonsav, furánkarbonsav, benzoesav és fenilecetsav, a sók közé tartoznak a két- vagy három- 65 bázisú savak antibiotikum sóinak alkálifémszármazékai is. A sók általában vízben oldhatók, és úgy állíthatók elő, hogy az antibiotikum vizes oldatához sztöchiometrikus mennyiségben savat adunk, és a keletkezett oldatot liofilizáljuk. A sók a vizes oldatokból ki is csaphatók olyan módon, hogy vízzel elegyedő oldószert, például kevés szénatomos alkilketont, például acetont, kevés szénatomos alkoholt, például metanolt, ciklusos étert, például tetrahidrofuránt, vagy kevés szénatomos tercier amidot, például dimetilformamidot vagy dietilacetamidot adunk hozzá. Az antibiotikumok biológiai tulajdonságai A) G-418 antibiotikum A G-418 antibiotikum különféle Gram-pozitív és Gram-negatív baktériumokkal szemben mutatott in vitro antibakteriális hatékonyságát, amelyet a szakértő által jól ismert szabványos módszerekkel állapítottunk meg, a 12. és 13. táblázatokban foglaltuk össze. 12. táblázat In vitro antibakteriális hatékonyság -Táptalaj: triptózfoszfát folyékony táptalaj, pH-ja 7,2-7,5. Mikroorganizmus Legkisebb gátló koncentráció (/ig/ml) Staphylococcus aureus 209P 0,8 Gray 7,5 Wood 0,8 Ziegler 0,8 Streptococcus sp. C >25 C203 17,5 Escherichia coli Sc 3,0 894 7,5 Klebsiella pneumoniae DA20 3,0 Pseudomonas aeruginosa VA6 3,0 37 17,5 11