167429. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 2,4,6,8-dekatetraén-dikarbonsav-mono-4-(1,2-epoxi- 1,5-dimetil-4-hexenil) -5-metoxi-1-oxaspiro (2,5)okt-6-IL-észtert tartalmazó fermentlé feldolgozására
167429 5 6 üveglombikban szobahőfokon 500 ml acetonnal .extraháljuk intenzív kevertetés mellett, majd üvegszűrőn szűrjük és a csapadékot ismét extraháljuk 150 ml acetonnal, amelyet szintén üvegszűrőn kiszűrünk. Az extraktleveket egyesítjük és a térfogatra számítva 2% derítőszenet (12,5 gramm) adagolunk, 15 percig kevertetünk és vákuum alkalmazásával szűrünk, majd 30 C°-on bepároljuk az oldatot 60—80 ml-re. A képződött fumagillin tartalmú szuszpenzióhoz 8 gramm diciklohexilamint adunk intenzív kevertetés mellett 15 perc alatt. így a fumagillin diciklohexilamin-sója képződik. A reakció heterogén fázisban játszódik le. A csapadékot 0 C°-ra hűtjük, szűrjük, acetonban szuszpendáljuk és vákuumszárítóban 30 C°-on megszárítjuk. Kitermelés 62% A fumagillin diciklohexilamin só 6,2 gramm hatóanyagot tartalmaz. A termék minőségi jellemzői az alábbiak: Tapasztalati képlet: C38H57O7N. Molekulasúly: 639. Olvadáspont: 148—152 C°. Szín: fehér vagy világos drapp színű. Forma: kristályos. Oldhatóság: acetonban hidegen gyakorlatilag nem oldódik, vizes acetonban 10—15% oldódik, metanol, aceton és klórozott szénhidrogének jól oldják. Stabilitás: A vegyület oxigén, fény, hő, sav és lúgérzékeny. Különösen bomlékony, ha ezek a tényezők együttesen hatnak. A hatóanyagtartalom meghatározása spektrofotometriásán történik. 2. 20 liter Aspergillis fumigatus (dep. szám 630 704/23 OKI), tenyészetéből nyert 120—140 órás fermentléhez állandó kevertetés mellett adagolunk 50 ml 30% formaiint tartalmazó vizes oldatot. A fermentlé hatóanyag szintje átlagosan 500 gamma/ml, tehát 10 g fumagillin hatóanyagot tartalmaz. A formaimnál kezelt fermentlevet állandó kevertetés mellett 40 ml tömény foszforsavval pH = 3.0—3,3-ra állítjuk. A habzás megakadályozására 8 g antihabzint adagolunk. Ezután 50 g Hyflo Super Celt rétegzünk egy vákuumszűrőn levő 1000 om2 felületű Seitz papírra és vákuum alkalmazásával leszűrjük az előkezelt fermentlevet. A kiszűrt csapadékot szuszpendáljuk 7 liter csapvízben, amelyben előzetesen 16 g granulált nátrium-hidroxidot oldottunk. A szuszpenziót ismét 1000 cm2 alapterületű szűrőre visszük, amelyen 50 g szűrősegédanyag van elhelyezve. Az élesre szűrt oldat pH-értékét 20 ml tömény foszforsavval beállítjuk pH =3,0-3,3-ra, amikor a fumagillin hatóanyag finom eloszlású kolloid csapadék formájában kiválik. A csapadékot 50 g szűrősegédanyag alkalmazásával alkülönítjük. A szűrés befejezése után 100 g. nedves csapadékot kapunk, amelyet felszuszpendálunk 100 ml vízmentes acetonban és a szuszpenziót vákuumszűrőn leszűrjük. A hozam 80 g, amelyhez adunk 72 g butilacetátot. A sűrű szuszpenziót tálcába, majd vákuumszekrénybe helyezzük és 60 C°-os hőmérsékleten megszárítjuk. A száraz termék súlya 62 g; az anyagot 1000 ml vízmentes acetonban szuszpendáljuk és 35 C°-on 30 percig extraháljuk. A művelet befejezése után hozzáadunk 5 g aktív szenet és a szuszpenziót „élesre" szűrjük. A 900 ml térfogatú extraktlevet vákuum alkalmazásával 150 ml-re töményítjük be. Az 50 000 gamma/ml töménységű fumagillin tartalmú oldathoz 400 ml desztillált vizet adagolunk, és a rendszer pH-ját 1 ml foszforsavval PH = 3,0-ra állítjuk be. A fumagillin tartalmú szuszpenzió hőmérsékletét 45 C°-ra emeljük és ezen laz értéken tartjuk 20 percig, majd a hőmérsékletet 5 C°nra csökkentjük. A képződött kristályokat kiszűrjük. A nyers kristályok súlya 22 g, melyet felszuszpendálunk 120 ml vízimentes acetonban és 300 ml desztillált vizet adagolunk, majd a rendszer pH-ját 1 g foszfoirsíavval pH = 3,0-ra állítjuk be. A szuszpenzió hőmérsékletét 45 C°-ra emeljük és 20 percig ezen az értéken tartjuk, majd 5 C°-ra hűtjük és 2 órán át 'kristályosítjuk. A képződött kristályokat szűrjük, majd 50 ml 25 tf% acetomt tartalmazó vízben szuszpendáljuk, ismét szűrjük, majd a fuanagillint 60 C°-on vákuum alkalmazásával szárítjuk. Kitermelés: 68%, 6,8 g. A termék jellemzői: op.: 192—194 C°, (a20 D = = —26° (metanolban); UV abszorpciós maximum: 304,351 m/j,; szín: világos drapp, forma: kristályos; oldhatóság: oldódik a következőkben: kloroform, metanol, aceton, butilacetát, vizes közegalkalikus pH stb.; oldhatatlan: benzinben, széntetrakloridban, vízben, savakban. Spec. ext. koeff.: E ^°cm 351 = 1465. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás 2,4,6,8-dekatetraén-dikarbonsav-mono-4-(l,2-epoxi-l,5-dimetil-4-hexenil)-5-metoxi-l-oxaspiro[2,5]okt-6-il-észter és sói, előnyösen diciklohexilaminsója előállítására fermentléből, előnyösem Aspergillus fumigatus által előállított fermentléből, azzal jellemezve, hogy a 2,4,6,8-ddkatetraén-dikairbonsav-momo-4--(l,2-epoxi-l,5-d!íimetil-4-hexenil)-5-metoxi l-oxaspiro[2,5]okt-6-il-észtert tartalmazó fermentlé pH-ját 3,0—4,0-re állítjuk be, a kivált 2,4,6,8-dekatetraén-dikarbonsav-mono-4--(1,2-epoxi-l ,5-dimetil-44iexenil)-5-metoxi l-oxaspiro[2,5]o| kt-6-il-észtert a jelenlevő micéliummal együtt szűrjük, a 2,4,6,8-dikatetraén--dikarbonsav-mono-4-(l,2-epoxi-l,5-dimetil 4-hexenil)-5-metoxi-l-oxaspiro[2,5]okt-6--il-észtert vizes lúg oldattal só formájában olio 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 3
