167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
19 167369 20 eleggyel mossuk, és az így kapott BOC-Cys(Bzl)Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 -t megszárítjuk. Olvadáspontja 224°, [a]f>° -13° (c=l, dimetüformamidban). EF részsorozat: BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH 18,4 g BOC-Cys(Bzl)-Ser-Asn-Leu-Ser- 1( -NHNH2 -t (F részsorozat) feloldunk 150 ml dimetüformamidban, az oldatot -20°-ra hűtjük, hozzáadunk 40 ml 2 n dioxános hidrogénklorid oldatot és 15 ml terc-butilnitritet. Tíz perc múlva -20°-on hozzáadunk még 28 ml trietilamint és 16,2 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH-t (E részsorozat), és 16 óra hosszat 25°-on keverjük. Ezután leszűrjük, az oldatot bepároljuk, és a maradékot n ecetsavval mossuk. BOC-Cys(Bzl)Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OH-t 2C kapunk. Olvadáspontja 217°, [á\h° =-17° (c=l, dimetüformamidban). A kapott terméket 5000 ml száraz cseppfolyós ammóniában oldjuk, keverés és az ammónia fonása közben nátriumfémet adunk hozzá sötétkék színeződésig, majd ammóniumkloriddal elszíntelenítjük. Ezután szárazra pároljuk, és a maradékot n ecetsavval és acetonnal mossuk. Szárítás után BOC—Cys-Ser-Asn—Leu—Ser—Thr— Cys-Val-Leu-OH-t kapunk. Olvadáspontja 248° (bomlik), [<xß°=-41° (c=l, dimetilformamid-víz 30 3 : 1 arányú elegyében). Az így kapott nonapeptidet 5000 ml 0,01 n vizes ammóniában oldjuk, keverés közben n hidrogénperoxid oldatot adunk hozzá negatív nitroprusszid-reakcióig, majd még 200 ml jégecetet, leszűrjük, és az oldatot liofilizáljuk. így BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH-t kapunk. Olvadáspontja 238° (bomlik), [aß0 =-18° (c=l, 3:1 arányú dimetilformamid-víz elegyben). 40 EF1 részsorozat: Piv_Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH 45 BOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH-t (EF részsorozat) 300 ml trifluorecetsavban oldunk az oldatot 30 percig 25°-on állni hagyjuk, bepároljuk, a maradékot etilacetáttal mos- 50 suk, és 300 ml dimetüformamidban oldjuk. Ehhez az oldathoz az alább ismertetett módon előáüított 30 g pivalinsav-p-nitrofenilésztert és 14 ml trietilamint adunk, 16 óra hosszat 25°-on állni hagyjuk, bepároljuk, és a maradékot kloroformmal mossuk. 55 A maradékot 300 ml dimetüformamidban oldjuk, hozzáadunk 50 ml vizet és 50 g Dowex-50-et, 15 percig keverjük, leszűrjük, a Dowex—50-et dimetilformamiddal mossuk, és a szüredéket szárazra pároljuk. A maradékot előbb kloroformmal, 60 majd etüacetáttal mossuk, és szárítjuk. Piv— -Cys-Ser-Asn-Leu-^Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH-t kapunk. Olvadáspontja 243°, [ö ]^° = _ 17° (c =l, 3 :1 arányú dimetilformamid-víz elegyben). 65 Pivalinsav-p-nitrofenilészter 95 g pivalinsavat és 131 g p-nitrofenolt feloldunk 1000 ml etilacetátban, hozzáadunk 197g diciklohexükarbodiimidet, az oldatot 2 óra hosszat 25°-on keverjük, leszűrjük, a szüredéket bepároljuk, és a maradékot etilacetát és petroléter elegyéből átkristályosítjuk. Pivalinsav-p-nitrofenilésztert kapunk. Olvadáspontja 104°. EF2 részsorozat: EOC-Cys-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-OH Az EF1 részsorozat előállításával analóg módon, az EF részsorozatból és az alább leírt eljárással előáüított szénsav-p-nitrofenil-etilészterből kiindulva az EF2 részsorozathoz jutunk. Olvadáspontja 263°, [a]D°'=-21° (c=l, 3:1 arányú dimetilformamid-víz elegyben.) Szénsav-p-nitrofenil-etilészter 200 g p-nitrofenolt és 113 ml piridint feloldunk 1200 ml etüacetátban, az oldatot 0°-ra hűtjük, keverés közben hozzáadunk 156 ml klórhangyasav-etüésztert, még 30 percig 0°-on keverjük, vízzel mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, és szárazra pároljuk. A maradékot dietiléterben oldjuk, és petroléter hozzáadásával kikristályosítjuk a szénsav-p-nitrofenü-etüésztert. Olvadáspontja 65°. F3 részsorozat: Bzl-MCP-Ser~ Asn-Leu-Ser-NH-NH2 a) H-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl Lásd az F a) részsorozatot. b) H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl Lásd az F b) részsorozatot. c) Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNHj 18,5 g H-Ser-Asn-Leu-Ser-OMe • HCl-ből és 13,5 g Bzl-MCP-ONP-ből kiindulva az F c) részsorozat előállítására használttal azonos eljárás szerint Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNHj-t kapunk. Olvadáspontja 251°, [a]f,°=-16? (c=l, dimetüformamidban). EF3 részsorozat: 1 j MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-NHNH2 16,2 g Bzl-MCP-Ser-Asn-Leu-Ser-NHNH2 -t (F3 részsorozat) 150 ml dimetüformamidban oldunk, az oldatot -20°-ra hűtjük, hozzáadunk 40 ml 2 n dioxános hidrogénklorid oldatot és 15 ml terc-butilnitritet. 10 perc múlva -20°-on hozzáadunk még 28 ml trietilamint és 24,8 g H-Thr-Cys(Bzl)-Val-Leu-OMe • 1,3 HBr-t (E b) 10
