167369. lajstromszámú szabadalom • Eljárás lazac kalcitonin és származékai savaddiciós sóinak előállítására
li 167369 12 szűrjük. Z-Gln-Thr-Tyr -Pro-QH-t kapunk hab alakjában, [a]TM = -19° (c=l, dimetilformamidban). c) Z-Lys(BOC)-Tyr-OMe 5 143,9 g Z-Lys(BOC)-OH» DCHA-t feloldunk 60C ml meleg dimetilformamidban, és lehűlés után 35°-on hozzáadjuk 65,1 g H-Tyr-OMe • HCl-nek 200 ml dimetilformamiddal készült oldatát, mire a 10 teljes diciklohexilamin-hidroklorid kikristályosodik. Szűrés után a szüredékhez 30 g N-hidroxiszukcinimidet adunk, —15°-ra hűtjük, és hozzáadjuk 53,6 g diciklohexilkarbodiimidnek 200 ml acetonitrillel készült oldatát. 15 óra hosszat 0°-on 15 rázzuk, a diciklohexilkarbamidot szűréssel eltávolítjuk és a szürédéket vákuumban bepároljuk. A maradékot etilacetátban oldjuk, 5%-os nátriumhidrogénkarbonát oldattal, vízzel, n kénsawal és ismét vízzel mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, 20 és bepároljuk. Z-Lys(BOC)-Tyr-OMe-t kapunk hab alakjában, [áfa0 =-6° (c=l, metanolban). d) Z-His-Lys(BOC)-Tyr-NHNH2 25 113,5 g Z-Lys(BOC-Tyr-OMe-t 2 liter metanolban oldunk, hozzáadjuk 10 g 10% palládiumot tartalmazó palládiumszénnek 50 ml 4 n sósavval készült szuszpenzióját, és szobahőmérsékleten atmoszférikus nyomáson hidrogénezzük. Három órai 30 hidrogénezés után az elméletileg szükséges hidrogénmennyiség 90%-a fogyott. A katalizátort szűréssel eltávolítjuk, és a szürédéket vákuumban teljesen bepároljuk. A kapott habszerű H-Lys(BOC)-Tyr-OMe • HCl-vékonyrétegkroma- 35 tográftailag egységes, és a következőképpen kapcsoljuk Z-His-N3 -mal: 88,5 g Z-His-NHNH2 -t 1800 ml dimetilformamidban oldunk, -20°-ra hűtjük, hozzáadunk 40 405 ml 3,7 n éteres hidrogénklorid oldatot, és hozzácsepegtetünk 36,6 ml terc-butilnitritet —20° -on való perces keverés után hozzáadunk 270 ml trietilamint és H-Lys(BOC)Tyr-OMe • HCl-nek 27,3 ml trietilamint tartalmazó 45 600 ml dimetilformamiddal készült oldatát, öt óra után a kikristályosodott trietilamin-hidrokloridot szűréssel eltávolítjuk. A szürédéket nagyvákuumban bepároljuk, a maradékot etilacetát és víz 2:1 arányú elegyében oldjuk, a szerves fázist 4 ízben 50 15%-os nátriumklorid oldattal mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, és bepároljuk. A maradékot kloroform és metanol 98:2 arányú elegyében oldjuk, és 25-szörös mennyiségű kovasavgélt tartalmazó oszlopon megszűrjük. így amorf 55 Z-His-Lys(BOC)-Tyr-OMe-t kapunk. [a]o0 -=-11° (c = l, dimetilformamidban). 90,4 g Z-His-Lys(BOC)-Tyr-OMe-t 300 ml metanolban oldunk, és hozzáadunk 20 ml hidrazinhidrátot. Két napi állás után a képződött hidrazid kikristályo- 60 sodik. Hozzáadunk 300 ml étert, leszivatjuk, éterrel mossuk, és vákuumban megszárítjuk. Z-His-Lys(BOC)-Tyr-NHNH2 -t kapunk. Olvadáspontja 187°, [ajj)0 fr-24° (c = 1, dimetilformamidban). 65 e)Z-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH 36,7 g Z-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH-t feloldunk 500 ml dimetilformamidban, hozzáadunk 15 g 10% palládiumot tartalmazó paládiumszenet, szobahőmérsékleten és atmoszférikus nyomáson hidrogénezzük, és a katalizátort szűréssel eltávolítjuk. A szüredék H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH-t tartalmaz, ezt a következőképpen kapcsoljuk Z~His-Lys(BOC)-Tyr-N3 -mai: 40,4 g Z-His-Lys(BOC)-iyr-NHNH2 -t feloldunk 400 ml dimetilformamidban az oldatot -20°-ra hűtjük, és hozzáadunk 88 ml 2 n dioxános hidrogénklorid oldatot, majd 7,3 ml terc-butilnitritet. -20°-on való 10 perces keverés után hozzáadunk 37 ml trietilamint és a H-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH-nak a fentiek szerint kapott dimetilformamidos oldatát. 20°-on való 5 órai állás után vákuumban teljesen bepároljuk, a maradékot 5 :1 arányú etilacetát-n-butanol elegyben oldjuk, az oldatot nátriumkloridot tartalmazó híg ecetsavval mossuk, nátriumszulfáton megszárítjuk, és koncentráljuk. A nem teljesen bepárolt olajhoz étert adunk, jól elkeverjük, és leszivatjuk. Nagyvákuumban megszárítva Z-His-Lys(BOC)-Tyr-Gln-Thr-Tyr-Pro-OH-t kapunk. Olvadáspontja 193°, [a]l°=-33° (c= 1, dimetilformamidban). ABC részsorozat: H-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Thr-Asn-Thr-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2 • 3 CH3 COOH 10 g heptapeptidet (C részsorozat) feloldunk 100 ml dimetilformamidban, az oldatot bepároljuk, a maradékot 100 ml dimetilformamidban oldjuk, az oldathoz hozzáadunk 15 g N-hidroxiszukcinimidet, 0°-ra hűtjük, hozzáadunk 5g diciklohexilkarbodiimidet, 3 óra hosszat reagálni hagyjuk, a kivált diciklohexilkarbamidot szűréssel elválasztjuk, a szürédéket 30 ml-re koncentráljuk, és a keletkezett Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-OSU heptapeptidoxiszukcinimidésztert éter hozzáadásával kicsapjuk. Éterrel való kimosás után a maradékot 100 ml dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 10 g nonapeptidamidot (AB részsorozat), és 16 óra hosszat reagálni hagyjuk. .Ezután hozzáadunk 500 ml etilacetátot, és leszűrjük. A maradékot dimetilformamidban oldjuk, hozzáadunk 10 ml ecetsavat, és etilacetáttal ismét kicsapjuk. Szűrőn elválasztjuk, etilacetáttal, majd éterrel mossuk, és megszárítjuk. Z-His-Lys(BOC)-Leu-Gln-Thr-Tyr-Pro-Arg-Asn-Gly-Ser-Gly-Thr-Pro-NH2-2AcOH-t kapunk, [ajtf =-19° dimetilformamidban. Ezt közvetlenül feloldjuk 80%-os ecetsavban. Az oldathoz 5g palládiumszenet adunk, és szobahőmérsékleten atmoszférikus nyomáson hidrogénezzük. Ezután leszűrjük, a szürédéket 20°-on nagyvákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot éterrel mossuk. Káliumhidroxid forgácson való szárítás után az ABC részsorozatot kapjuk. Olvadáspontja 170° (bomlik), [aß0 =-53° (c= 1, n ecetsavban). 6
