167362. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hidroxokobalamin- sók előállítására és/vagy tisztítására
3 167362 4 nem kristályosítható, ezért koncentráltabb oldatot kell készíteni. Ennek megoldására rúg vizes oldatból a hidroxokobalamin sót szerves oldószerrel extrahálják, majd elválasztás után a kevés vizet is tartalmazó szerves extraktumhoz acetont adnak, miután két fázis képződik és a hidroxokobalamin só ismét a vizes fázisba kerül, így tömény vizes oldatot kapnak, melyből a hidroxokobalamin só kristályosítható. A fenti műveletek különösen a hidroxokobalamin szerves savakkal képezett sói esetében viszonylag nagy anyagveszteséggel járnak tekintettel arra, hogy a hidroxokobalamin sók megoszlási hányadosa a nagy molekulasúly miatt a szerves fázisból történő visszaextrakció tekintetében kedvezőtlen. Az ismert eljárások hátránya, hogy különösen a hidroxokobalamin szerves savakkal képzett sói előállítása esetén csak közvetett utón képesek többlépéses bonyolult eljárással és ennek következtében alacsony kitermeléssel gyógyászatban alkalmazható tisztaságú hidroxokobalamin só előállítására. Célul tűztük ki olyan eljárás kidolgozását, melyben gyógyászatban alkalmazható tisztaságú hidroxokobalamin sókat az irodalpmból ismerteknél egyszerűbb utón és magasabb kitermeléssel állítunk elő, valamint hogy eljárásunk alkalmas legyen a hidroxokobalamin szerves savakkal képzett sóinak egyszerű előállítására is. Azt találtuk, hogy amennyiben a nyers hidroxokobalamint vagy valamely sóját bázikus, majd savas ioncserélő oszlopon történő tisztítás után kis szénatomszámú alifás karbonsav, aprotikus bipolares vagy aprotikus inert oldószer és víz 1-0,25 i 1—0,25 : 1 arányú terner elegyével eluáljuk, majd az eluátumból a terméket aceton hozzáadásával leválasztjuk, vagy adott esetben az eluátumhoz az eluáló szerves savnál legalább két pK.a egységgel erősebb szerves vagy szervetlen savat adunk, és ezt követően acetonnal a terméket leválasztjuk, kívánt esetben a terner eleggyel végzett eluciót a gravitáció következtében fellépő áramlással ellentétes irányban végezzük, akkor nagy tisztaságban és igen jó kitermeléssel, az alkalmazott savaknak megfelelő hidroxokobalamin sókat állíthatjuk elő. A találmány tárgya eljárás hidroxokobalamin sók előállítására és/vagy tisztítására a hidroxokobalamin vizes oldatának karboximetil-cellulóz ioncserélő oszlopon történő adszorpciója útján, melyre jellemző, hogy az adszorbeált hidroxokobalamint valamely kis szénatomszámú alifás karbonsav, valamely aprotikus bipolares vagy aprotikus inert oldószer és víz 1-0,25 : 1-0,25 : 1 arányú terner elegyével eluáljuk, adott esetben az eluátumhoz valamely, az eluáló szerves savnál legalább két pIQ egységgel erősebb szerves vagy szervetlen savat adunk, majd az eluátumból a terméket aceton hozzáadásával kinyerjük, kívánt esetben az eluciót az adszorpció folyamatában résztvevő oldószer, illetve oldat áramlási irányával ellentétes irányba végezzük. A találmány szerinti eljárás foganatosításánál oly 5 módon járhatunk el például, hogy a nyers hidroxokobalarnin-hidrokloridot, melyet előnyösen a cianokobalaminból történő többlépéses szintézis útján kaptunk, vízben, célszerűen ionszegény vízben oldunk és az oldatot valamely bázikus 10 karakterű ioncserélő oszlopra, mint például dietilamino-etil-ceUulóz (DEAE) ioncserélő oszlopra visszük, majd a hidroxokobalamin bázist az oszlopról vízzel, célszerűen ionszegény vízzel eluáljuk. A nyers hidroxokobalamin bázis vizes oldatát 15 valamely savas karakterű ioncserélő oszlopra, előnyösen karboximetil-cellulóz (CMC) ioncserélő oszlopra visszük, ezt követően a hidroxokobalamin mellől a semleges karakterű szennyezéseket vízzel, célszerűen ionszegény vízzel az oszlopról kimossuk. 20 Az oszlopról a hidroxokobalámint valamely kis szénatomszámú alifás sav, valamely aprotikus bipoláros vagy aprotikus inert oldószer . és víz 1—0,25:1—0,25:1 arányú terner elegyével eluáljuk. 25 Kis szénatomszámú alifás karbonsavként előnyösen ecetsavat vagy propionsavat, aprotikus inert, illetve aprotikus bipoláros oldószerként előnyösen dioxánt, illetve metiletil-ketont vagy acetont alkalmazunk. 30 Az eluátumot aceton hozzáadásával a hidroxokobalamin sóra vonatkoztatva túltelített oldattá alakítjuk, majd a kiváló vagy kikristályosodó sót az oldószertől elkülönítjük. Ily módon a hidroxokobalamin valamely kis szénatomszámú alifás kar-35 bonsawal képezett sóját nyerjük. A találmány szerinti eljárással bármely más 5-nél kisebb pKa értékű szervetlen vagy szerves savval képezett hidroxokobalamin sót is előnyösen állíthatunk elő oly módon, hogy a találmányunk 40 szerinti eljárással nyert eluátumhoz hozzáadjuk a kívánt só anionjának megfelelő, az eluáló szerves savnál erősebb szerves vagy szervetlen savat, célszerűen a mőlviszonyok alapján számítotthoz ké-I pest feleslegben, célszerűen 10% feleslegben, majd 45 ezt követően aceton hozzáadásával az oldatot a hidroxokobalamin sóra vonatkoztatva túltelítjük, minek következtében a kívánt hidroxokobalamin só oldószertől való elkülönítése önmagában ismert módszerekkel könnyen megvalósítható. 50 A találmány szerinti eljárás egyik előnyös foganatosítás! módja, szerint a savas karakterű, célszerűen karboxi-metil-cellulózt tartalmazó ioncserélő oszlopról a hidroxokobalamin eltávolítását (az adszorpció folyamatában résztvevő oldószer, 55 illetve oldat áramlási irányával ellentétes irányú elucióval végezzük. Ily módon az eluálószer először a kevésbé koncentrált hellyel érintkezik és az elució legvégén a legkoncentráltabbal, minek eredményeként lényegesen töményebb oldat nyerhető, 60 mint egyenes irányú elució esetében, így nemcsak az izolálási veszteségek csökkennek, hanem tisztább , terméket is kapunk. A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy szabadalmi igényünket 65 ezen példákra korlátoznánk: 2
