167327. lajstromszámú szabadalom • Eljárás libainfluenza elleni hiperimmun szérum előállítására

5 167327 6 jelenlevő szérum az antigén hatását csökkentheti. Hiperimmunizálásra csak akkor kerülhet sor, ha a libaállomány oltáskor egészséges és azt 15 nappal megelőzően fertőző betegségben nem szenvedett. A hiperimmunizálás két oltással történik. Első 5 alkalommal 2 ml, 10—12 nap múlva pedig 15 ml antigént oltunk a nyak bőre alá. A hiperimmunizált állatokat a 2. oltást követő 10-12 napon véreztetjük el. A vért a liba nyakára erősített műanyag 10 tasakban fogjuk fel, azonnal defibrináljuk, majd ml-ként 400 E penicillint és 4 mg streptomicint adunk hozzá és +4C°-ra hűtjük le. A libavért hipertóniás nátriumklorid- oldat és babkivonat hozzáadása után szeparáljuk. A babkivonatot úgy 15 készítjük, hogy 21 kg nagyszemű fehérbabot durvára darálunk, 6 liter csapvízben 75 C°-on 30 percen át extraháljuk, majd centrifugáljuk. A folyékony fázishoz 5%-os fenol-oldatot adunk olyan mennyiségben, hogy a kivonat 0,5% fenolt 20 tartalmazzon. Ebből 1 liter vérhez 8 ml-t adunk. Az így nyert vérsavót 2%-nyi 0-propiolaktonnal kezeljük, 24 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd a továbbiakban +4 C°on tároljuk, körülbelül két hét múlva a szérumot 0,5% fenollal 25 konzerváljuk és legalább egy hónapi +4C°-on történő pihentetés után sterilre szűrjük. A hiperimmun szérum sterilitási ártalmatlansági és hatékonysági vizsgálatát az alábbi módon végezzük: 30 Sterilitási vizsgálat 37 C°-on termosztátban történő tenyésztéshez a szérum 0,5-0,5 ml-ével oltunk be egy-egy cső 35 agart, lóhuslevest és Tarozzi f. táptalajt. A szobahőmérsékleten (22 C°) történővizsgálathoz ugyancsak 0,5—0,5 ml-t oltunk egy-egy cső maltózt tartalmazó agárra, lóhuslevesbe és Tarozzi-f. táptalajba. A termosztátban tartott táptalajokat egy 40 hét után, a szobahőmérsékleten tartottakat pedig 14 nap után bíráljuk el. A szérumnak az összes táptalajon sterilnek kell bizonyulnia. Ártalmatlansági vizsgálat 45 A hiperimmun szérum 2 ml-es adagjával 10 darab 2-3 napos kislibát oltunk a nyak bőre alá. Egyidejűleg 10 darab kislibát oltatlan kontrollként hagyunk. Az állatokat 28 napig tartjuk megfigyelés 50 alatt. A szérumozott kislibáknak mindvégig tünet-A kiadásért felel: a Közgazdasági 766091 - Zrír mentesnek kell maradniok, illetve, az interkurrens elhullások száma nem lehet több, mint az oltatlan csoportban adódó kiesések mértéke. Hatékonysági vizsgálat A hiperimmun szérum hatékonyságát vírusközömbösítő próbával vizsgáljuk. Az 56C°-on 30 percig inkativált, hígítatlan szérumhoz az antigéntermeléshez használt „B" vírustörzs 10-es léptékű hígításainak azonos mennyiségét adjuk. A szérum-vírus keveréket és az ezzel párhuzamosan készült vírushígítási sort 1 órán át 37 C°-on tartjuk, majd hígításonként 5-5 darab 10 napos libaembriót oltunk. 0,2 ml-es adaggal. A kísérletet a 7. napon zárjuk le. A szérum megfelelő, ha a neutralizációs index legalább 100. (A neutralizációs index meghatározásának a leírása: Bakács T., Farkas E.: Orvosi Virológia, Medicina Könyvkiadó, Budapest, 1965. 158. oldal.) Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás libainfluenza elleni hiperimmun szérum előállítására ,azzal jellemezve, hogy 7-11 napig, előnyösen 9 napig előkeltetett libatojásokat megfertőzünk a 00098 MNG szám alatt letétbe helyezett libainfluenza- vírussal, a 3. és 8. közötti, előnyösen 4. és 7. nap közötti időben a vírus hatására elhalt embriókat és a tojások membránját homogenizáljuk, hozzáadjuk az allantoammion folyadékot, majd fiziológiás nátriuklorid-oldattal végzett hígítás után a hígított antigén folyékony fázisával libákat két alkalommal oltunk, a 2. oltást követő 8—14 napon, előnyösen 10—12. napont az állatokat elvéreztetjük, majd a vérsavót elválasztjuk a szérum ártalmatlanságának biztosítására valamely ismert virucid és bakteriad anyaggal, előnyösen 0-propiolaktonnal kezeljük és ismert módon konzerváljuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az antigénnel 33—35 napos ún. pecsenyelibákat vagy nem hizlalt felnőtt libákat oltunk be két izben, 10-12 napos időközben, 2 ml-re, 15 ml-re. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az elválasztott vérsavót azzal jellemezve, hogy az elválasztott vérsavót 2%o g-propiolaktonnal kezeljük, majd 1-3 hét múlva 0,5% fenollal konzerváljuk. s Jogi Könyvkiadó igazgatója i Nyomda 3