167326. lajstromszámú szabadalom • Eljárás vízoldható enzimek oldhatatlanná tételére mikrokapszulába vagy gélbe zárás útján

7 167326 8 5. példa 7. példa Penicillin-aciláz bezárása nitrocellulóz mikrokapszulába Szentirmai módszerével [Acta Microbiol. Acad. Hung. Sei. 12, 39 (1965)] előállított penicillin-aciláz-szuszpenziót közelítőleg 20 mg/ml koncentrációra állítunk be 0,5 telítettségű 7,5 pH-jú ammónium-szulfát oldattal. A bezárást az 1. példában leírt módon végezzük 3%-os kollódium-oldattal. Az oldható enzimet 0,05 mólos, 7,5 pH-jú foszfát-pufferrel végzett ismételt mosással távolítjuk el. A mikrokapszulákat desztillált vízzel ionmentesre mossuk, majd liofilizáljuk. Az aktivitásra számolt kitermelés 2-3%. 10 15 Aldoláz beágyazása poliakrilamid-gélbe Az 1. példa szerinti kristály-szuszpenzióhoz a 6. példa szerinti mennyiségben akriíamidot, N,N' -metilén-bisz-akrilamidot ""'és tetrametilén-diamint adunk. A polimerizálást a 6. példa szerinti koncentrációjú ammónium-perszulfát-oldat hozzáadása után 20 C° hőmérsékleten végezzük. A kapott gélt éjjelen át állni hagyjuk, majd szűrőn vagy vásznon átsajtolva felaprítjuk, 0,1 mólos, 7,0pH-jú foszfát-pufferrel többször átmossuk és centrifugáljuk. A kimosott gél az eredeti enzim-aktivitás 21-52%-át tartalmazza. 6. példa 20 D-Glicerin-aldehid-3-foszfát-dehidrogenáz beágyazása poliakrilamid-gélbe D-Glicerinaldehid-3-foszfát-dehidrogenáz 1. a 3. 25 példát 0,5-2,0 mg/ml koncentrációjú 0,7 telítettségű ammónium-szulfát-oldattal készített kristály-szuszpenziójának 10 ml-éhez 225 mg akriíamidot, 25 mg N,N'-metilén-bisz-akrilamidot és 0,05 ml tetrametilén-diamint adunk, majd a rendszert 30 homogénre keverjük, és 0,1 ml 50 mg/ml koncentrációjú ammóniumperszulfát-oldat hozzáadásával a polimerizációt megindítjuk. A gélképződés alatt a szuszpenziót 5 C°-on tartjuk, majd éjjelen át állni hagyjuk. Ezután a gélt szűrőn vagy ritka szövésű 35 vásznon átsajtoljuk. Az így felaprított gélt 10"3 mól/liter ciszteint vagy 2-merkapto-etanolt tartalmazó « 0,1 mólos, 7,0 pH-jú foszfát-pufferrel többször mossuk és centrifugáljuk mindaddig, amíg a felüluszó enzimaktivítást mutat. Az így kimosott 40 gél az eredeti enzim-aktivitás 0,2-1%-át mutatja. Szabadalmi igénypontok: 1. Eljárás a dehidrogenázok, acilázok, aldolázok vagy peroxidázok csoportjába tartozó vízoldható enzimek oldhatatlanná tételére, az enzimnek felületi polikondenzációval kialakított poliamidból vagy koacervációval kialakított nitrocellulózból készült mikrokapszulába vagy polimerizációval készített poliakrilamid gélbe való bezárása útján, azzal jellemezve, hogy az enzim vizes oldatából kisózással vagy kicsapással vizes kristály- vagy aggregátum-szuszpenziót készítünk, és ezt a szuszpenziót mikrokapszulába vagy gélbe zárjuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim Msózását ammóniumszulfáttal vagy alkálifém-szulfáttal, előnyösen nátriumszulfáttal végezzük. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az enzim kicsapását vízzel elegyedő szerves oldószerrel, célszerűen 1—3 szénatomot tartalmazó ketonnal előnyösen etanollal vagy acetonnal végezzük 0C° alatti, előnyösen 0 C° és -5 C° közötti hőmérsékleten. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 4 766091 - Zrínyi Nyomda