167285. lajstromszámú szabadalom • Eljárás triciu-izotóppal jelzett nagy fajlagos aktívitású telítetlen zsírsavak előállítására
167285 5 6 izotóppal jelzett 6-eisz, 9-cisz, 12-ciszroktadekatrién-1-01 nyersterméket (1,111 g) 30 g ezüstnitrát-, tal impregnált szilikasavval töltött oszlopon növekvő étertartalmú n-heptán-éter eluenssel kromatografálva tisztítjuk. Az oszlopkromatográfiánál alkalmazott adszorbenst szovjet gyártmányú (Reachim) szilikasavból készítjük az alábbi módon: Alumíniumfóliával beburkolt főzőpohárban 100 g szilikasavat szuszpendalunk 110 g ezüstnitrátból készített 50%-ós, desztillált vizes oldatban. A kapott pépet keverés közben vízfürdőn 30 peréig forraljuk. Ezután a meg nem kötött ezüstnitrát-oldatot Büchner tölcséren enyhe szívással leszűrjük. A nedves adszorbenst 24 órán át 120 °C-on aktiváljuk, azután 50 g celitet keverünk hozzá. Az így kapott impregnált szilikasavat (kb. 200 g) zárt porüvegben sötétben tároljuk. ab) 6-cisz, 9-cisz, 12-CÍsz-oktadekatriénsav-metilészter (y-linolénsav-metilészter) redukciója nátrium -bór-triciddel. 0,1892 g (5 mmól) nátrium-bór-tricid 60 ml 0 -°C-os abszolút etilalkoholos oldatához keverés közben hozzácsepegtetjük 1,462 g (5 mmól) y-linolénsav-metilészter 5 ml abszolút etilalkoholos oldatát. A reakcióelegyet 2 órán át 0 °C-on keverjük, majd 8 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután a reakcióelegyet a kalcium-bór-tricides redukciónál leírt módon dolgozzuk fel. A kapott nyerstermék a C,-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 6-cisz, 9-cisz, 12-cisz-oktadekatrién-l-01 és a változatlan y-linolénsav-metilószter elegye, melyet a fent ismertetett oszlopkromatográfiás eljárással választunk szét. ac) 6-cisz, 9-cisz, 12-cisz-oktadekanoil-klorid (ylinolénsav-klorid redukciója nátrium-bór-triciddel. 0,374 g (10 mmól) nátrium-bór-tricidet feloldunk 50 ml abszolút dioxánban, az oldatot 0 °C-ra hűtjük és keverés közben hozzácsepegtetjük 1,48 g (5 mmól) y-linolénsav-klorid abszolút dioxános oldatát. Az elegyet 30 percen át 0 °C-on, majd 4 órán át szobahőmérsékleten keverjük. Ezután a dioxánt csökkentett nyomáson eltávolítjuk, a maradékhoz 50 ml jeges-vizet adunk és jéghűtés közben 2 n kénsavval megsavanyítjuk (pH = 2), 2x50 ml éterrel extraháljuk, az egyesített éteres fázist vízzel semlegesre mossuk és vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, majd csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradék (1,2 g) C^-es metiléncsoportban tricium-izotóppal jelzett 6-cisz, 9-cisz, 12-cisz-oktadekatrién-1-01. b) A Cj-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 6-cisz,12-cisz-oktadekatrién-l-01 lánchosszabbítása. 1.058 g (4 mmól) kalcium-bór-tricides redukcióval kapott Cj-es metiléncsoportján tricium-izotóppal jelzett 6-cisz,9-cisz,12-cisz-oktadekatríén^l-01 5 ml abszolút piridines oldatát keverés közben —15 °C-on hozzácsepegtetjük 3,813 g (20 mmól) tozil-klorid 10 ml abszolút piridines oldatához, majd 3 órán át 0 °C-on keverjük. Intenzív hűtés és keverés közben a reakcióelegyet 2 n kénsavval megsavanyítjuk és 2X20 ml éterrel extraháljuk. Az éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. A bepárlási maradék a C^-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 6-cisz,9-cisz, 12-cisz-oktadekatrién-l-01 tozil-észterét tartalmazza. 5 1,36 g (3,25 mmól) fenti triciált tozil-származékot 1 g vízmentes nátrium-jodid 25 ml abszolút acetonos oldatához adunk, és az elegyet 3 órán át forraljuk. Lehűlés után az elkülönült p-toluol-szulfonsav-nátriumot szűrjük, és a szűrletet csökkentett nyo-10 máson szárazra pároljuk. A maradékot 25 ml éterben felvesszük és 2,5%-os, vizes nátriumtioszulfát-oldattal, majd vízzel mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A bepárlási maradék Ct -es metiléncsoporton tricium-izotóppal jel-. 15 zett l-jód-6-cisz,9-cisz,12-cisz-oktadekatrién. 0,115 g (5 mmól) fémnátriumot 10 ml n-butilalkoholban oldunk és hozzáadunk 0,681 g (4,25 mmól) malonsav-dietil-észtert, majd 5 percig 120 °C-on keverjük. Ezután hozzácsepegtetjük a fenti 20 módon készített 1,123 g (3 mmól) C^-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett l-jód-6-cisz,9--cisz,12-cisz-oktadekatrién 2,5 ml n-butilalkoholos oldatát. A reakcióelegyet keverés közben 3 órán át forraljuk és lehűlés után szárazra pároljuk. A desz-25 tillációs maradékhoz hozzáadunk 15 ml 5%-os etilalkoholos káliumhidroxid-oldatot és 2 órán át keverés közben forraljuk. Lehűlés után 100 ml vizet adunk az elegyhez és 25 ml 1:1 arányú éter-petroléter-eleggyel extraháljuk. A vizes fázist jeges-hűtés 30 közben tömény sósavval megsavanyítjuk, majd 2X25 ml éterrel extraháljuk. Az éteres fázist vízzel semlegesre mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és bepároljuk. A bepárlási maradékként kapott C3 -as metiléncsoporton tricium-izotóppal jel-35 Z ett 2-karboxi-8-cisz,ll-cisz,14-cisz-ejkozatriénsav nyersterméket 30 ml kinolinban réz-por jelenlétében 2 órán át 120 °C-on melegítve dekarboxilezzük. Lehűlés után a reakcióelegyet jégre öntjük és 2 n kénsavval megsavanyítjuk (pH = 2). Ezután a meg-40 savanyított elegyet 3X50 ml éterrel extraháljuk, az éteres extraktumot vízzel semlegesre mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk és csökkentett nyomáson bepároljuk. Az így kapott C3 -as metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 8-cisz,ll-cisz,14-45 -cisz-ejkozatriénsav nyersterméket 30 g ismertetett módon készített ezüstnitráttal impregnált szilikasav oszlopon növekvő étertartalmú éter-heptán elegyekkel eluálva tisztítjuk. Termelés: 0,307 g C3 -as metiléncsoporton tricium-50 -izotóppal jelzett 8-cisz,ll-cisz,14-cisz-ejkozatriénsav (25% a C^-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 6-cisz,9-cisz,12-cisz-oktadekatrién-l-01-ra számolva). Összehasonlítottuk az előállított C3 -as metilén-55 csoporton tricium-izotóppal jelzett 8-cisz,ll-cisz,14--cisz-ejkozatriénsavnak és a szintézise során nyert jelzett intermediereknek (0,-es metiléncsoporton tricium-izotóppal jelzett 6-cisz,9-cisz,12-cisz-oktadekatrién-1-01 és tozilésztere, C^-es metiléncsopor-60 ton tricium-izotóppal jelzett l-jód-6-cisz,9-cisz,12--cisz-oktadekatrién, C3-as metilén-csoporton tricium -cisz-oktadekatrién, C3 -as metilén-csoporton tricium-izotóppal jelzett 2-karboxi-8cisz,ll-cisz,14--cisz-ejkozatriénsav és dietilésztere) a vékonyréteg-65 kromatográfiás viselkedését a megfelelő nem jelzett 3
