167266. lajstromszámú szabadalom • Eljárás S-adenozil-L-metionin- tri-p-toluolszulfonát és e vegyületét hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására
167 266 5 6 kapunk, amely literenként 3,55 g SAM-ot tartalmaz. Ez azt jelenti, hogy a kiindulási vegyület 99,5%-a az oldatban van. Az előbbi oldat 14 literét 1 liter hidrogén formájú Amberlite IRC 50 műgyantán adszorbeáljuk, azután 200 liter vízzel, 10 liter 0,025 n ecetsavval, majd 3 liter 1 mólos p-toluolszulfonsav oldattal eluáljuk. A p-toluolszulfonsavas eluátumot 100 mles frakciókban szedjük. A lényegében tiszta SAM-ot tartalmazó frakciók [a meghatározást vékonyrétegkromatográfiás úton végeztük az Anal. Biochim. 4, 16—23 (1971) közlemény szerint] összesen 1,8 litert tesznek ki, és oszlopra vitt anyag 85%-át tartalmazzák. Az így kapott oldatot 1,7 liter hidroxil formájú Amberlite IRA 900 anioncserélő műgyantával kezeljük. Szűrés és a műgyanta vízzel való mosása után 2,2% p-toluolszulfonsavat és 0,85% SAM-ot tartalmazó oldatot kapunk. Az oldatot szobahőmérsékleten vákuumban betöményítjük 600 ml-re, azután acetont adunk hozzá. Fehér porszerű mikrokristályos só válik ki, amely szagtalan, higroszkópos és vízben igen jól, (25% fölött) oldható, miközben színtelen oldat képződik. A só kisebb mértékben oldódik metanolban és etanolban, acetonban, metiletilketonban, kloroformban, nagyobb szénatomszámú alkoholokban és benzolban oldhatatlan. Hozam (SAM-ban kifejezve): 64%. Analízis a C^H^NgO^ (M= 915,1) képlet alapján: számított: C 47,20%, H5,15%, N 9,18%, S 14,00%; talált: C 46,9%, H 5,3 %, N 9,2 %, S 13,8 %. További analízisadatok: p-toluolszulfonsav számított: 56,4%, talált: 55,8%; SAM számított: 43,6%, talált: 42,5%. Az anyag súlyvesztesége 12 óra szárítás után vákuumban, szobahőmérsékleten P2 0 5 -ön: 1,5— 2%Nedvességtartalma K. Fischer szerinti meghatározással: 1,5—2%. Az új vegyület UV spektrumában az abszorbciós maximumok 256 nm-nél, E= 15 600 (6 n kénsav) és 260 nm-nél, E= 16 300 (pH=7) találhatók. Ezek az adatok egybevágnak az új vegyület II képlet szerinti értelmezésével. Az új vegyületet ezen felül enzimatikus módszerrel is azonosítottuk oly módon, hogy nikotinamidot vagy guanidinecetsavat SAM-mal enzimatikus metilezésnek vetettük alá. [C. L. Cantoni, J. Biol. Chem. 189, 745 (1951); ibid. 204, 403 (1953); G. De La Hóba, G. A. Jamieson, S. H. Mudd, H. H. Richards, J. A. C. S. 81, 3975 (1959)] 2. példa 9 kg élesztőt az 1. példa szerinti módon kezelünk, majd a sejtek lízise után 13,8 liter SAM-oldatot kapunk, amely 3,60 g/l SAM-ot, vagyis a kezelt anyag 99%-át tartalmazza. Ezt az oldatot 1 liter hidrogén formájú Amberlite IRC 50 műgyantára adszorbeáljuk, azután 200 liter vízzel, 10 liter 0,025 n ecetsavval és 3 liter 4 n sósavval eluáljuk. A sósavas eluátumot 100 ml-es frakciókban szedjük. A tiszta SAM-ot tartalmazó frakciók, amelyeket az 1. példa szerinti módon vizsgálunk, összesen 5 0,8 litert tesznek ki, és az oszlopra vitt anyag 87%át tartalmazzák. Az eluátumot 40 °C-on vákuumban szárazra pároljuk. Ezután vízzel 5% SAM-ot tartalmazó oldatot készítünk a maradékból, az oldatot 0 °C-on tartjuk, és az oldathoz hidroxil for-10 májú Dowex 50 gyantát adunk, mindaddig, míg az oldat mintája kloridmentesnek mutatkozik. A gyantát kiszűrjük, 110 g p-toluolszulfonsavat adunk az oldathoz, azután az oldatot 600 ml-re betöményítjük. A tömény oldathoz metilalkoholt 15 adunk mindaddig, míg a csapadékkiválás befejeződik. Szűrés és a SAM tri-p-toluolszulfonátjának megszárítása után az 1. példa szerinti termékhez hasonló tulajdonságú terméket kapunk. A SAM-ra vonatkoztatott hozam: 66%. 20 3. példa Az élesztősejtek 2. példa szerinti lízise után kapott 1,38 liter SAM oldatot (3,60 g/l SAM) 1 liter 25 hidrogén formájú Amberlite IRC 50 ioncserélő műgyantára adszorbeáltatjuk, majd a műgyantát 200 liter vízzel, 10 liter 0,025 mólos ecetsavval, végül 3 liter normál kénsavval eluáljuk. A kénsavas eluátumot 100 ml-es frakciókban szedjük. 30 A SAM-ban legdúsabb frakciókat (össztérfogat 1,8 1, az oszlopra vitt termék 86%-a) Ba(OH)2 szuszpenzióval kezeljük 0 °C-on, míg a szulfát teljesen eltűnik. Szűrés és a báriumszulfát mosása után 108 g 35 p-toluolszulfonsavat adunk az oldathoz, és a továbbiakban a 2. példa szerinti módon járunk el. Az 1. példa szerinti termékhez hasonló SAM tri-p-toluolszulfonátot kapunk, melyben a SAM hozama: 67%. 40 4. példa 43,3 g SAM 13,8 liter térfogatú oldatát ioncserélő oszlopra visszük és a 2. példa szerinti módon vizes sósavoldattal eluáljuk. A SAM-tartalmú frakciókat 45 40 °C-on vákuumban szárazra pároljuk. A maradékhoz vizet adunk olyan mennyiségben, hogy 10% klorid-tartalmú oldat képződjék, azután a terméket acetonnal kicsapjuk. Az így kapott só elemzési adatai: 50 klorid 16,86% SAM 78,85% H2 0 4,2% A só 10 g-ját 200 ml vízben oldjuk és a kloridokat 0 °C-on hidroxil formájú Dowex 50 gyantával tá-55 volítjuk el. Az oldathoz 19,7 g p-toluolszulfonsavat adunk, a keveréket 80 ml-re betöményítjük vákuumdesztillációval 40 °C hőmérsékleten, azután acetonnal kicsapjuk a SAM tri-p-toluolszulfonátot. A termék megegyezik az 1. példa szerinti termékkel. 60 A SAM-ra vonatkoztatott hozam: 60%. 5. példa 13,8 liter oldatot, amely 3,60 g/l SAM-ot tartal-65 maz, és amelyet a 3. példa szerinti módon kaptunk, 3
