167255. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új bisz(benzamido)- benzoesav-származékok előállítására
5 1672SS 6 Vegyületek Hemolízisgátlás mértéke 13. példa terméke 14. példa terméke 17. példa terméke 18. példa terméke 19. példa terméke 20. példa terméke 22. példa terméke 23. példa terméke benzamidin fenilbutazon szalicílsav mefenámsav + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + 80%-nál nagyobb gátlás IX 10~5 mólnál mintegy 50%-os gátlás IX 10~5 mólnál [ 20%-nál kisebb gátlás IX 10~5 mólnál | vagy l 80%-nál nagyobb gátlás IX10-4 mólnál mintegy 50%-os gátlás IX10-4 mólnál 20%-nál kisebb gátlás IX 10-4 mólnál 2. kísérlet Immunreakció által előidézett hemolízis gátlása A következő négyféle oldatot készítettük: A. Antiszérumoldat A kereskedelemben beszerezhető birka vért fiziológiás sóoldattal háromszor mostuk, és percenként 2000 fordulattal 5 percig centrifugáltuk. 1 ml tömörített birka vörösvér sejtet 10 ml fiziológiás sóoldatban újra szuszpendáltunk, és a keletkezett szuszpenziót 0,2 ml-es adagban (eV cs 5 W) egerekbe intravénásán injektáltuk. Az injekció után 4 nappal az egerekből vérmintát vettünk. A mintából anti birka vörösvérsejt antitestet tartalmazó szérumot nyertünk ki, és ezt zselatint, Ca++ -ós-Mg++ -t tartalmazó, 7,5 pH-jú Vernal pufferoldattal (GVB+ + ) eredeti térfogatának 40-szeresére hígítva antiszérum oldatot kaptunk. B. Komplementoldat Komplementforrásként tengerimalac-szérumot alkalmaztunk. A komplementoldat előállítására a tengerimalac-szérumot GVB++ -vel eredeti térfogatának 40-szeresére hígítottuk. Az oldat előállításának mindegyik műveletét hűtés közben hajtottuk végre. C. Birka vörösvérsejt-szuszpenzió Birka vörösvérsejteket GVB++ -ben szuszpendáltunk. 0,25 ml ilyen szuszpenziót vízzel 3,3 ml-re feltöltve teljesen hemolizáltunk, majd a keletkezett szuszpenziót úgy állítottuk be, hogy optikai sűrűsége 541 m^-nál 0,455 legyen. D. Vizsgálandó vegyület oldata A vizsgálandó vegyületet GVB++ -ben úgy oldottuk fel, hogy koncentrációja másfélszerese legyen az előre meghatározott végső koncentrációnak. 2 ml vizsgálandó oldathoz hozzáadtunk 0,5 ml antiszérumoldatot, 0,25 ml birka vörösvérsejt-10 15 20 25 30 40 45 50 55 60 szuszpenziót és 0,25 ml komplementoldatot, majd a kapott keveréket 40 percig 37°-on inkubáltuk. Ezután a reakciókeverókhez a reakció megállítására 0,3 ml 3,8%-os vizes trinátriumcitrát-oldatot adtunk. A hemolizálatlan birka vörös vérsejteket a keverékből percenként 2000 fordulattal 5 percig centrifugálva választottuk le. A felülúszó folyadék abszorpcióját 541 m/í-nál mértük. Ettől elkülönítve kontrollkísérletet végeztünk a fentihez hasonló módon, azzal a különbséggel, hogy 2 ml GVB++ -t vizsgálandó vegyület nélkül alkalmaztunk. Mindegyik vizsgálatban vakpróbaoldatot is készítettünk a fentemlített módon azzal a különbséggel, hogy 0,25 ml komplementoldat helyett 0,25 ml GVB++ -t használtunk, és korrekciót végeztünk a vizsgálandó oldat színeződése által okozott kísérlet hiba helyesbítésére. A hemolízisgátlás mértékét (%) a következő egyenlet segítségével számítottuk ki: Hemolízisgátlás mértéke (%): vizsgálandó ve a megfelelő vak-' gyületet tártai- próba abszorpmazó minta ab- ciója szorpciója = 1-\ a kontroll abszorpciója a kontroll vakpróbájának abszorpciója •xioo A kapott eredményeket a 2. táblázatban foglaltuk össze. 2. táblázat Vegyület Hemolízisgátlás mértéke 1. példa terméke + + + 2. példa terméke + + + 8. példa terméke + + + mefenámsav + nátriumkromoglukát + szalicilsav — fenilbutazon + + + + + : 50%-nál nagyobb gátlás 3,5x 10~4 mólnál vagy 80%-nál nagyobb gátlás 8,8XlO-4 mólnál + : 50—80%-os gátlás 8,8X 10~4 mólnál + : 20—50%-os gátlás 8,8X 10~4 mólnál : 20%-nál kisebb gátlás 8,8XlO-4 mólnál. 1. példa 4,6 g 3,5-diamino-benzoesav, 15,3 g káliumacetát és 80 ml víz keverékéhez keverés közben és a hőmérsékletet 0—5°-on tartva egyszerre hozzáadjuk 17,5 g 2-acetoxi-benzoilklorid 20 ml dioxánnal készült oldatát. Ezután a keverést egy óra hosszat ugyanezen a hőmérsékleten, majd 30 percig szobahőmérsékleten és 30 percig 50°-on folytatjuk. A keletkezett reakciókeveréket 200 ml hideg, híg sósavba öntjük, és a csapadékot szűrőn elválasztjuk. Ezt 3
