167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
167238 51 52 46. H-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-acetát 3,6 g 45. pontban nyert Z-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH vegyületet 100 ml 80%-os ecetsavoldatban oldunk és az oldatot 0,5 g (10%-os) palládium-szén katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel befejeztével a katalizátort leszívatjuk és az oldatot szárazra pároljuk. A színtelen gyantaként keletkezett oktapeptidszármazék acetátját nagy vákuumban szárítjuk. 47. Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 1,60 g Z-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-NH-NH2 vegyülethez 25 ml dimetilformamidot adunk, majd —20°ra hűtjük és 4 ml 2,5 n vizes sósavoldatot adunk hozzá. —20°-on addig keverjük, míg a hidrazid teljesen feloldódik. Ezután 2,0 ml 1,0 n nátriumnitritoldatot csepegtetünk hozzá, a reakció elegyet —10°ra melegítjük és 20 percig —10°-on tartjuk. Ezután —10°-ra hűtött, 1,50 g H-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-acetát 25 ml 80%-os dimetilformamidos oldatát és 1,11 g N-metilmorfolint adunk hozzá. A reakcióelegyet 16 órán át 0°-on tartjuk. Ezután nagy vákuumban kb. 8 ml-re pároljuk be és jéghideg, 1%-os ecetsavoldat hozzád adásával kicsapjuk. Leszívatjuk, majd vákuumexszikkátorban szárítjuk. A nyersterméket tisztítás céljából dimetilformamid-etilacetat elegyből kétszer kicsapjuk. A védett dodekapeptid termelés 2,1 g. 48. H-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-acetát 1,85 g fenti, védett dodekapeptidet 50 ml 90%-os ecetsavoldatban oldunk és 0,4 g 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében a szokásos módon hidrogénezzük. A katalizátort leszívatjuk, az oldatot bepároljuk és nagy vákuumban szárítjuk, az így visszamaradt H-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH acetátját minden további tisztítás nélkül tovább alakítjuk. 49. Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH 2,30 g Z-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-NH-NH2 vegyületet 35 ml dimetilformamidban oldunk és 3,5 ml —20°-ra hűtött 3 n vizes sósavoldathoz csepegtetjük. Ezután 2,7 ml 0,9 n nátriumtritoldatot adunk hozzá és a reakcióelegyet 20 percig —10°-on állni hagyjuk. Ehhez 1,72 g H-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-OH-acetát —10°-ra hűtött, 30 ml 90%-os dimetilformamidos oldatát és 1,0 g N-metilmorfolint csepegtetünk. Az elegyet 18 órán át 0°-on tartjuk, nagy vákuumban olajjá sűrítjük be és a terméket 100 ml jéghideg 2%-os citromsavoldattal kicsapjuk. A csapadékot alaposan eldörzsöljük, lecentrifugáljuk, négyszer kis mennyiségű jeges vízzel utánamossuk és vákuumexszikkátorban nátriumhidroxid felett szárítjuk. Tisztítás céljából dimetilformamid-etilacetat elegyből többször kicsapjuk. 50., Z-Ala-Pro-NH2 2,28 g H-Pro-NH2 és 7,57 g Z-Ala-ONP vegyületeket 20 ml dimetilformamidban oldunk és a sárga 5 oldatot 18 órán át szobahőmérsékleten állni hagyjuk. Ezután nagy vákuumban szárazra pároljuk, a maradékhoz etilacetátot adunk és a keletkezett port alaposan eldörzsöljük. Leszívatás és szárítása után 5,5 g Z-AlaRPro-NH2 keletkezik. Op.: 164— 10 165°. 51. Z-Gly-Ala-Pro-NH2 5,1 g fenti dipeptidszármazékot melegítés közben 200 ml, előre hidrogénezett terc-butanol-víz (9:1) 15 elegyben oldunk. A szobahőmérsékletre hűtött oldatot 1 g (10%-os) palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel befejeződése után az oldatot gyorsan, 30° fürdőhőmérséklet mellett, 0,01 torr nyomáson szárazra pároljuk, 20 a H-Ala-Pro-NH2 maradékot 300 ml —20°-ra hűtött dimetilformamidban oldjuk és a -következőképpen készített Z-Gly-OH vegyes anhidrid oldatot adjuk hozzá: 3,7 g Z-Gly-OH és 2,65 ml abszolút trietilamin elegyét 25 ml abszolút tetrahidrofurán-25 ban oldjuk és a —10°-ra hűtött oldathoz keverés és hűtés közben 1,85 g klórhangysav-etilésztert csepegtetünk úgy, hogy a hőmérséklet ne emelkedjen —5° fölé. Ezután —10°-ra hűtjük, 5 percig állni hagyjuk, majd az elegyet, nem törődve a kivált trietilamin-30 -hidrokloriddal, a fenti H-Ala-Pro-NH2 oldathoz adjuk. Egy óráig —10°-on és 18 óráig 0°-ban tartjuk, majd szűrjük az oldatot és a szűríetet vákuumban, majd nagy vákuumban szárazra pároljuk. Ezután 1 liter kloroformot adunk hozzá, a trietil-35 amin-hidrokloridotle szűrjük a kloroformos oldatot kétszer 20—20 ml félig telített nátriumkloridoldattal mossuk, nátriumszulfáttal szárítjuk és bepároljuk. A keletkezett tripeptidszármazék szilikagéles vékonyrétegkromatogramon 0,58 Rf -értéket ad 40 (metanolban). 52. H-Gly-Ala-Pro-NH2 3,8 g, 51. pontban nyert nyers tripeptidszármazékot az 51. pontban leírtak szerint hidrogénezünk. 45 A katalizátor leszívatása és az oldószer elegy lepárlása után visszamaradó termék szilikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során metanollal 0,15 Rf-értéket mutat. Termelés 2,2 g. 50 53. Z-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 Az 52. pontban keletkezett nyers tripeptidamidot 30 ml dimetilformamidban oldjuk. Az oldathoz 4,1 g Z-Val-ONP vegyületet adunk. 18 órán át szobahőmérsékleten tartjuk, majd a sárga oldatot száraz-55 ra pároljuk, a maradékhoz etilacetátot adunk, eldörzsöljük, leszívatjuk, a pelyhes csapadékot 2 liter kloroformban oldjuk, az oldatot kétszer 20—20 ml 5%-os citromsavoldattal és kétszer félig telített nátriumkloridoldattal mossuk. Ezután a klorofor-60 mos oldatot nátriumszulfát felett szárítjuk és bepároljuk. A maradékot melegítés közben 100 ml etilacetáttal egyesítjük és 0°-on történő állás után a szilárd porként megjelenő tetrapeptidszármazékot leszívatjuk. Op.: 205—210°. Rf -érték sziligagéles 65 lemezen: 0,80, kloroform-metanol rendszerben. 26
