167238. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új hipokalcémiás hatású peptidek előállítására
16723Ö 39 40 Z-Ile-OH, dicikl.: Justus Liebig's Ann. Chem. 640, 157 (1961) BOC-Leu-ONP: Rec. Trav. Chim. Pays-Bys 87, 257 (1968) Z-Cys(BOC)-ONP: J. Chem. Soc. C 81 (1967) BOC-Met-ONP: J. Chem. Soc. 6130 (1964) BOC-Met-NH-NH2: Helv. Chim. Acta 41, 1852 (1958) BOC-Ser-OH: Bull. Chem. Soc. Japan 39, 1171 (1966) DPC-Ser(tBu)-OH: Justus Liebig's Ann. Chem. 743, 69 (1971) Z-Thr(tBu)-OH: Chem. Ber. 97, 2490 (1964) Z-Thr(tBu)-OMe: Justus Liebig's Ann. Chem. 670, 127 (1963) Z-Thr(tBu)-OSU: Hoppe^Seyler's Z. Physiol. Chem. 346, 60 (1966) H-Thr-OBzl: Justus Liebig's Ann. Chem. 749, 90 (1971) Z-Tyr(tBu)-OH-dicikl.: Justus Liebig's Ann. Chem. 670, 127 (1963). 1. példa H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Ays-Met-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Qsn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Ala-Pro--NH2 -acetát (kalcitonin M acetát) 150 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr I (tBu)-Cys-Met-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr (tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Pro-NH2 vegyületet 3 ml 95%-os trifluorecetsavban oldunk, nitrogénnel átöblítjük, és 90 percig 25 °C-on állni hagyjuk. A felszabadított dotriakontapeptidamid trifluoracetátját ezután 60 ml abszolút és peroxidmentes éter hozzácsepegtetésével amorf porként kicsapjuk, lecentrifugáljuk, 10 ml friss éterben szuszpendáljuk, ismét centrifugáljuk és a maradékot 30°-on szárítjuk. Az acetáttá átalakításhoz a trifluoracetátot 3 ml vízben és 0,02 n ecetsavval egyensúlyba hozott, gyengén bázisos ioncserélőgyanta oszlopon (például Merck Nr. II, 0 = 7,5 mm, 1 = 20 cm) szűrjük. 0,02 n ecetsavoldattal negatív Folin-reakcióig mossuk, az eluátumot kb. 5 ml-re koncentráljuk be, és egy 0,1 n ecetsavoldattal egyensúlyba hozott Bio-Gel P 6-os oszlopon szűrjük. (A gélágy térfogata 200 ml.) Az eluátumot vékonyrétegkromatográfiiás módszerrel vizsgáljuk (Alox, 52. sz. rendszer). A fő frakciókat (maximum kb. 100—120 ml-nél) egyesítjük, forgó bepárlóban (a belső hőmérséklet 20°-nál nem lesz több) szárazra pároljuk, 5 ml vízben ismét feloldjuk, és végső tisztításként n-butanol-jégecet-víz (4:1:5 tf.) rendszerben legalább 500 lépésben Craig-extrakciónak vetjük alá, 3 ml-es fázistérfogatok mellett. A 141—180. megoszlatási frakciókat (maximum a 162. frakcióban K = 0,48) szárazra pároljuk, (forgó bepárlóban, belső hőmérséklet legfeljebb 20°), 0,1 n ecetsavoldatban oldjuk, majd a kromatográfíailag és elektroforetikusan egységes dotiakontapeptidamid-acetátot liofilizálva fehér amorf port nyerünk. Kitermelés: 97%. Az anyag vékonyrétegkromatográfiásan a követ-5 kező Rf - értékeket adja: „Alox"D-0 (Camag; Alumíniumoxid 8% gipsszel)-on Rf (52) = 0,56 10 Rf (79) = 0,66 Rf (45) = 0,45 „Selecta" 1440 cellulózon (Fa. Schleicher és Schuell, 15 kész lemezek) Rf (45) = 0,51 Rf (101A = 0,60 Elektroforézis „Selecta" 1440 cellulózon 20 pH 1,9, 1,5 óra, 280 V; vonal: 3,5 cm-re a katód felé pH 7,1, 1,5 óra, 280 V; vonal 1,3 cm-re a katód felé A kiindulási anyagot a következőképpen állíthat-25 juk elő: 1. Z-Asn-Leu-OMe 16,7 g H-Leu-Ome- és 46,0 g Z-Asn-ONP vegyületeket 100 ml frissen desztillált dimetilformamid-30 ban oldunk. Az oldatot 19 órán át 25°-on állni hagyjuk. Ezután 1,2 liter vizet adunk hozzá és a kristályos csapadékot leszívatjuk. A dipeptidszármazékot 40°-on vákuumban szárítjuk, majd metanol-víz elegyből kétszer átkristályosítjuk. Op.: 35 180—181°; [af°D = + 9° (c = 2,05, kloroformban). 2. H-Asn-Leu-OMe 15,0 g Z-Asn-Leu-OMe vegyületet 400 ml terc-butanol-víz (9:1) elegyben oldunk és 2 g palládium-40 -szén (10%-os) katalizátor jelenlétében hidrogénezünk. A hidrogénezés befejeztével leszívatjuk a katalizátort és a szűrletet 40°-on bepároljuk. A maradék közvetlenül felhasználható a továbbiakban. 45 3. Z-Gly-Asn-Leu-OMe 4,4 mmol H-Asn-Leu-OMe vegyületet 15 ml dimetilformamidban oldunk, majd 5,5 mmól Z-Gly-ONP vegyületet adunk hozzá. A tiszta, sárga olda-50 tot 18 órán át 27°-on tartjuk. Ezután nagy vákuumban 40°-on bepároljuk, szárítjuk, és a maradékhoz etilacetátot adunk, mire az kikristályosodik. Egy órás0°-on történő állás után leszívatjuk és szárítjuk. Ezután a terméket ismét 25 ml etilacetátban szusz-55 pendáljuk, eldörzsöljük, leszívatjuk és szárítjuk. Op.: 154°. 4. H-Gly-Asn-Leu-OMe 1,3 g Z^-Gly-Asn-Leu-OMe vegyületet melegítés 60 közben 100 ml metanolban oldunk és a szobahőmérsékletre hűtött oldatot 0,3 g 10%-os palládium-szén-katalizátor jelenlétében hidrogénezzük. A hidrogénfelvétel befejeztével a katalizátort leszívatjuk és az oldatot szárazra pároljuk. így 760 nig, amorf 65 alakú H-Gly-Asn-Leu-OMe keletkezik. 20
