167224. lajstromszámú szabadalom • Eljárás bízben oldhatatlan penicillin-aciláz enzimkészítmény előállítására
11 167224 12 maldehiddel 25 °C hőmérsékleten 12 óra hosszat kezeljük. A fentiek szerint előkezelt gyantát az enzim-oldathoz adjuk, majd az elegyet 25 °C hőmérsékleten 6 pH-n 16 óra hosszat keverjük. Az így kapott készítményt leszűrjük, és puffer oldattal mossuk. A készítmény aktivitását a táblázat tünteti fel. Aktivitás enzim-egység/ gyanta g-ban 77 Az enzim-gyanta . , ,,-,,. készítmény spe- A kapcsolódási cifikus aktivitása "fkcio meríiM(min)g gyanta teke /o" ban 32 41,5 10 15 21. példa A 18. példában leírt eljárást 5 kg Amberlit XAD—7 gyanta alkalmazásával ismételjük meg, a többi komponens mennyiségét arányosan megnöveljük. Az így kapott 31 [jiM/min/g aktivitású enzim-készítményt 40 liter 6,5 súly/térfogat %-os benzilpenicillin-oldat hasításához használjuk fel. 6 órás reakcióidő után a készítményt 50-szer ismételten felhasználva az átalakítás átlagos hozama 95% volt. Szabadalmi igénypontok 115 62 19. példa A 18. példában leírt eljárást különféle tisztaságú enzimmel megismételjük. Az aktivitás értéke minden esetben 77 [xM/min/g gyanta volt. A specifikus aktivitást és a kapcsolási reakció hozamát a táblázat tünteti fel. Az enzim-gyanta A felhasznait készítmé enzim aktivitása cifikug aktivitása /<M(min)mg Protein gyanta JuM(min)g zam 3,8 6,1 13,8 35 30 1. Eljárás vízben oldhatatlan enzimkészítmény előállítására, vizes oldatban térhálós poliakrilát 28 45 vagy polimetakrilát gyantát egy Escherichia coli 20 törzsből, előnyösen az NCIB 8743 törzsből nyert penicillin-acilázzal és glioxallal vagy glutárakdehiddel hozva össze, azzal jellemezve, hogy az eljáráshoz egy alifás diamint, célszerűen 2—10 szénatomos a,(U-diaminoalkánt alkalmazunk. 25 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a térhálós poliakrilát vagy polimetakrilát gyantát a diamin jelenlétében először hozzuk össze a penicillin-aciláz-enzimmel, Kapcsolódási 30 majd ezt követően reagáltatjuk glioxallal vagy reakció, ho- glutáraldehiddel. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a térhálós poliakrilát 35 vagy polimetakrilát gyantát először a diaminnal és a glioxallal vagy glutáraldehiddel hozzuk össze, majd ezt követően kezeljük a penicillin-acilázzal. 4. Az 1—3. igénypontok bármelyike szerinti el-40 járás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a diamint és a glioxált illetve glutáraldehidet a térhálós poliakrilát vagy polimetakrilát gyanta grammjára számítva 0,01—20 mmól mennyiségben alkalmazzuk, a diamin és a glioxál illetve glu-45 táraldehid mólaránynak 1,0:0,1—1,0:40, célszerűen 1:1—1:10 értékei mellett. 5. A 4. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy a térhálós poliakrilát 50 vagy polimetakrilát gyanta grammjára számítva 0,1—5,0, célszerűen 0,2—2,0 mmól diamint alkalmazunk. 6. A 4. vagy 5. igénypont szerinti eljárás fogana-55 tosítási módja, azzal jellemezve, hogy a térhálós 99 86 poliakrilát vagy polimetakrilát gyanta grammjára számítva 0,1—10, célszerűen 2,5—5,0 mmól glioxált 135 88 vagy glutáraldehidet alkalmazunk. 31 40 59 %-ban 40 52 77 20. példa A 18. példában leírt eljárást megismételjük azzal az eltéréssel, hogy kisebb méretű Amberlit XAD—7 gyantát alkalmazunk. A gyanta-részecskék mérete a 18. példában 30 mesh, a 20. példában 200—400 mesh. Az eljárást két különböző enzim-koncentráció mellett ismételjük meg. Az enzim készít-Az eznimgyanta készít- ^ «"*"" TMt- Kapcsolódási meny aktivitása meny specifikus reakció) hozam MM(min)g aktivitása 0/ fe gyanta ^(min)g gyanta 115 154 A Kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.6081/4 — Zrínyi Nyomda, Budapest. — F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató 6
