167201. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 3-nitroimidazo [1,2 B] piridazin-származékok előállítására
167201 roxi- (rövidszénláncú) -alkilamino-csoportot, N-benzil-N-(rövidszénláncú)-alkilamino-csoportot, 3—6 szénatomos cikloalkilamino-csoportot, piperazino-csoportot (amely szubsztituensként rövidszónláncú alkil-, karbo-rövidszénláncú alkoxi-karbonil- vagy rövidszénláncú alkoxi-fenil-csoportot hordoz), imidazolino-csoportot, pirrolidino-csoportot, morfolino-csoportot, piperidino-csoportot, vagy piridil-(rövidszénláncú)-alkilamino-csoportot jelent, valamely (II) általános képletű vegyületet — ahol ß1 jelentése a fenti, X hidrogénatomot vagy nitrocsoportot jelent és V halogénatomot jelent — valamely (IV) általános képletű vegyülettel reagáltatunk — ahol az R2 és R 3 csoportok egyike hidrogénatomot, rövidszénláncú alkil-csoportot, (rövidszénláncú)-alkoxi-(rövidszénláncú)-alkil-csoportot, hidroxi-(rövidszénláncú)-alkil-csoportot, benzil-csoportot, 3—6 szénatomos cikloalkil-csoportot vagy piridil-(rövidszénláncú)-alkil-csoportot jelent, míg az R2 és R 3 csoportok másika hidrogénatomot vagy rövidszénláncú alkil-csoportot képvisel, vagy R2 és R3 a közbezárt nitrogénatommal együtt rövidszénláncú alkil-csoporttal, rövidszénláncú alkoxi-karbonil-csoporttal vagy (rövidszénláncú)-alkoxi-fenil-csoporttal szubsztituált piperazino-csoportot, imidazolino-csoportot, pirrolidino-csoportot, morfolino-csoportot vagy piperidino-csoportot képez—, és kívánt esetben valamely így kapott (I) általános képletű vegyületet, ahol R: jelentése a fenti és W amino- vagy rövidszénláncú alkilamino-csoportot jelent — 1—12 szénatomos karbonsav anhidridjével vagy halogenidjével, illetve rövidszénláncú karbonsav anhidridjével reagáltatunk; és ha a fenti reakciókban olyan (II) általános képletű vegyületből indultunk ki, amelyben X hidrogénatomot jelent és Rx és V jelentése a fenti, a kapott vegyületet kénsav és salétromsav elegyével vagy kénsav és valamely nitrát elegyével kezeljük. Kívánt esetben az (I) általános képletű vegyületeket gyógyászatilag alkalmazható savaddíciós sóikká alakíthatjuk. Az (1) általános képletű vegyületek legközelebbi szerkezeti és hatástani analógja a 2-metil-5-nitro-l-(2-hidroxi-etil)-imidazol (Physicians Desk Reference to Pharmaceutical Specialities and Biologicals, 25. kiadás, 1208—1209. oldal, kiadó: Medical Economics Inc., Oradell, N. J.) A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek melegvérűeken protozoa-ellenes, így trichomonas- és amőba-ellenes hatást fejtenek ki. A vegyületeket melegvérfieknek körülbelül 0,5—30 mg/testsúly kg dózisban adhatjuk be. A vegyületeket ismert módon, szokásos gyógyszerészeti segédanyagokkal elegyítve gyógyászati készítményekké, például pilulákká, kapszulákká, folyékony készítményekké, folyadók-kapuszlákká és hasonló készítményekké alakíthatjuk. A készítmények előállításához szokásos hordozó, töltő-, ízesítőanyagokat és egyéb segédanyagokat használhatunk fel. A találmány szerint előállított vegyületek amőbicid hatását W. R. Jones módszerével határoztuk meg [„The Experimental Infection of Rats with Entamoeba Histolytica and a Method for Evaluating the Anti-Amoebic Properties of New Compounds", Annals of Tropical Medicine and Parasitology, 40, 130—140 (1946)]. A vizsgálatot a következőképpen végeztük: Vizsgálandó mikroorganizmusként Entamoeba histolytica NIH 200 u-t használtunk fel. 3X5 ferde 5 tenyészetet alkalmaztunk. A tenyésztést 1:1 arányú szérum-sóoldat eleggyel fedett Cleveland Collier májinfúziós közegben végeztük, amelyhez növekedést elősegítő anyagként rizsport adtunk. A tenyészeteket 5 naponként ültettük át, és a tenyésztést 10 37 °C-on végeztük. Vizsgálati inokulumként 48 órás tenyészetet használtunk fel. A mikroorganizmusokat a vizsgálat reggelén gyűjtöttük össze úgy, hogy elkülönítettük a rizsport tartalmazó üledéket. Az amőbák a ferde tenyészet és a kémcső aljának 15 érintkezési pontján találhatók. Az amőbákat megszámláltuk, és az injekció formájában beadott inokulum amőba-tartalmát 200 000—250 000-re állítottuk be. A kísérlethez a Royalhart Tarms-on tenyésztett, Wistar-törzsbe tartozó, 20—35 g test-20 súlyú nőstény albínó patkányokat használtunk fel. A hasfal felmetszésével szabaddá tettük az állatok vakbelét, és az amőbatartalmú inokulumot a nyílás elülső részébe fecskendeztük. A nyílást csipeszekkel lezártuk. A sebészeti beavatkozást steril körülmé-25 nyék között végeztük. A megfertőzött patkányokat véletlenszerűen 10-es csoportokba osztottuk, és a kezelést a megfertőzés napján kezdtük meg. A hatóanyagot szokásos laboratóriumi táplálékkal (Purina Lab. Chow, a Ralston Purina Company cég termé-30 ke) összekeverve adtuk be. öt napig tartó kezelés után a patkányokat felboncoltuk, és makroszkopikusan megvizsgáltuk a vakbélen található kóros elváltozásokat. Az amőbák jelenlétét mikroszkópos vizsgálattal mutattuk ki. Meghatároztuk a nyálka-35 hártya és a rostszövet elváltozásait, és a gyulladásos elváltozásokat, és az elváltozások mértékét számokkal jelöltük. Az l-es szám azt jelenti, hogy a standard ferde preparátumon 1—20 amőba észlelhető, míg a 2-es szám azt jelenti, hogy a preparátumokon 40 20-nál több amőba található. Ennek megfelelően a boncolás során észlelt eredmények alapján az állatok fertőzési foka 0-tól 5-ig terjedő számokkal jellemezhető. Kiszámítottuk a kontroli-csoportba, illetve a kezelt csoportba tartozó állatok átlagos fertő-45 zöttségi fokát, majd meghatároztuk az egyes hatóanyagok aktivitását. Az aktivitás számítása során a kontrollokhoz viszonyított átlagos fertőzöttségi fok százalékos csökkenését határoztuk meg. Az állatok által elfogyasztott vizsgálandó vegyület meny-50 nyiségét az elfogyasztott táplálék súlya alapján számítottuk ki. A számítás szerint pl. a 6-metoxi-3-nitro-imidazo[l,2-b]piridazin és a 6-etoxi-3-nitro-imidazo[l,2-b]piridazin minimális hatásos dózisa (ami egyenlő 60%-os átlagos fertőzöttségi fok csök-55 kenéssel) kb. 30 mg/kg/nap X 5. A találmány szerinti eljárással előállított vegyületek trichomonas-ellenes hatással is rendelkeznek. A vegyületek trichomonas-ellenes hatását pl. a következő kísérlettel határoztuk meg: 60 Royalhart ICR törzsbe tartozó nőstény albínó egereket szubkután úton 50 000—100 000 Trichomonas vaginalis (Thoms-törzs) mikroorganizmussal fertőztünk meg. A mikroorganizmusokat cisztein-pepton-májinfúzió-maltóz közegben [Garth 65 Johnson és Ray E. Trussell: „Experimental Basis 2
