166890. lajstromszámú szabadalom • Eljárás FC-126 pulykaherpesvírus és Marek-betegséget okozó JM GA vírus stabil szuszpenziójának és liofilizátumának előállítására

166890 15 16 Á táblázat adataiból megállapítható, hogy még a 2 súly%-os szacharóz-koncentrációjú minták esetén is (1,0% vagy 0,1% albumin-tartalom mellett) liofilizáláskor jelentős védőhatás lép fel. 4. példa A következőkben a liofilizált sejtmentes FC—126 pulyka-herpesvírus (HVT) vakcínakénti alkalmazhatóságát vizsgáljuk, csirkék Marek-féle megbetegedés elleni védelmében. Egynapos és háromhetes, fertőzésre érzékeny csirkéket előre meghatározott mennyiségű vakcinával oltunk be, ós a beoltott, ill. be nem oltott csirkéket 20 vagy 22 nap elteltével Marek-féle megbetegedést okozó virulens vírusok hatásának tesszük ki. Az eredményeket a 6. táblázatban ismertetjük. 6. táblázat Liofilizált, sejtmentes FC—126 pulyka-herpesvírus törzzsel beoltott csirkék fertőzöttségi foka, és Marek-féle megbetegedéssel szembeni ellenállóképessége Kísérlet Állat kora Vírus Dózis HVT-fertőzés vizsgálata1 Érzékenység Marek-féle megbetegedéssel szemben2 száma oltáskor hígítás (FFU) (pos./fert.) viremia preci(pos./fert.) virémiás csirkék ] pitin nem virémiás csirkék 1. 1 nap 1:50 6000 9/9 0/10 0/10 ...3 1:500 600 10/10 0/10 0/10 1:5000 60 9/9 0/10 1/9 1:50 000 6 8/10 0/10 1/8 2/2 — •— 0/10 0/10 — 9/9 2. 3 hét 1:50 2700 10/10 -_, 1/10 0/10 1:500 270 10/10 0/10 0/10 1:5000 27 10/10 0/10 0/9 ... 1:50 000 2,7 7/10 0/10 1/7 3/3 •— — 0/10 0/10 ... 8/10 Megjegyzések: 1. Az oltás után 20 nappal (1. kísérlet) vagy 22 nappal (2. kísérlet) észlelt eredmények. A HVT-virémiawizsgálatot friss (1. kísérlet) vagy DMSO 35 védőanyag jelenlétében fagyasztott (2. kísérlet) álhártyás sejteken végeztük. 2. A csirkéket intraabdominálisan 10 000 FFU aktivitású JM vírussal megfertőzött sejtekkel oltottuk be. Az oltás után 8 héttel Marek-féle megbete- 40 gedésben elpusztult vagy Marek-féle megbetegedéssel nagymórtékben megfertőzött csirkéknél a reakciót pozitívnak tekintettük. A táblázatban feltüntetett pos./fert. arány a pozitív reakciónak a fertőzött csirkék számához viszonyított aránya. 45 3. ... = ebbe a kategóriába nem tartozik állat. A táblázat adataiból látható, hogy a beoltott csirkék nagy részénél még a 2,7 és 6 FFU-nek megfelelő dózisok is fertőzőnek bizonyultak, és a nagyobb dózisok valamennyi állaton fertőzést idéztek 50 elő. Megállapítható továbbá, hogy csaknem valamennyi beoltott csirke a Marek-féle megbetegedést okozó virulens vírusok hatásának még erős fertőzéskor is ellenáll, míg a be nem oltott kontrollok azonos mértékű fertőzés hatására csaknem teljes 55 számban elhulltak. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás FC—126 pulykaherpesvírus (ATCC 60 VR—584) és Marek-betegséget okozó JM és GA vírus (ATCC VE—585 és VR—624) életképes, stabil, sejtmentes, nagytöménységű szuszpenziójának és liofilizátumának előállítására, azzal jellemezve, hogy az említett vírussal megfertőzött, vírusforrás- 65 ként használt csirkevese- vagy csirkeembrió-kötőszövet-tenyészet sejtjeit 0,01—45%-ban valamely fehérjét, előnyösen albumint vagy kazeint, 0,2— 40%-ban keményítőt vagy valamely keményítőhidrolizátumot, 0,001—1 mól/liter puffer anyagot és 0,01—20%-ban valamely aminosav-sót tartalmazó stabilizálószerrel elegyítjük 0,05—1,0%, a sejtek, illetve a stabilizálószer szárazanyagát tekintve 5:1 és 100:1 közötti aránynak megfelelő mennyiségben, a megfertőzött sejtekből és a stabilizálószerből homogén szuszpenziót képezünk, a homogén szuszpenzióban levő sejteket ismert módon, előnyösen ultrahanggal szétroncsoljuk, a sejtekből így felszabadított érintetlen életképes vírusokat elkülönítjük, szuszpendáljuk, és kívánt esetben a kapott szuszpenziót liofilizálással feldolgozzuk. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy az 1. igénypont szerinti stabilizálószerben szuszpendált, életképes vírusokat, melyeket a szétroncsolt sejtekből kaptunk, elkülönítjük, szuszpendáljuk és liofilizáljuk. 3. Az 1. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja FC—126 pulykaherpesvírus-szuszpenzió és -liofilizátum előállítására, azzal jellemezve, hogy az FC—126 pulykaherpesvírus törzzsel megfertőzött, vírusforrásként használt csirkevese- vagy csirkeembrió-kötőszövet-tenyészet sejtjeit valamely fehérjéből, előnyösen albuminból vagy kazeinból álló és az 1. igénypontban megadott adalékanyagokat az ott megadott mennyiségben tartalmazó stabilizálószerrel elegyítjük 0,05—1%, a sejtek, illetve a stabilizálószer szárazanyagát tekintve 5:1 és 100:1 közötti aránynak megfelelő mennyiségben, a megfertőzött sejtekből és a stabilizálószerből homogén 3