166872. lajstromszámú szabadalom • Eljárás alfa-amiláz előállítására
166872 5 6 A fehérjeanyagok szorpciója után végezzük el ezeknek a szorbensről való eluálását. Az a-amilázt a kísérő fehérjeanyagoktól két lépéses elucióval választjuk el. Az első eluálási lépést 0,06 mólos, 7,15 pH-jú foszfátpufferrel hajtjuk végre, 5 ekkor osak az a-aimilázt kísérő fehérjeanyagoknak a szorbensről való deszorpciója megy végbe, és az a-amiláz a szorbensen marad. Az a-amiláz extrakciója végett az eluciót 0,001 mól CaCl2-ot tartalmazó, 0,11 mólos, 7,15 pH-jú foszfátpuffer- 10 rel ismételjük meg. Ezzel a pufferrel az a-amilázt tartalmazó frakciót teljesen kimossuk. Az a-amiláz kitermelés 300 mg-ot tesz ki 10 000 egység teljes aktivitással, azaz a deszorp- 15 ció után az a-amiláz kitermelés 100%-os. A dialízist, a szorpciót és a fehérjeanyagok elucióját + 8 C°-os hőmérsékleten végezzük. Az ilyen módon kapott a-amiláz fehérjehomo- 20 genitása következőképpen jellemezhető: ultracentrifugálásnál egy fehérjefrakciót, elektroforézisnél poliakrilamidgélen egy fehérjesávot kapunk. Az a-amiláz-frakció dietilamino-etilcellulózon való ismételt szorpciója és azt követő elu- 25 ciója után az a-amiláznak semmilyen inaktív frakcióját nem lehet izolálni. Az ilyen módon kapott a-amiláz specifikus aktivitása majdnem kétszerese az ismert eljárás szerint kapott a-amiláz specifikus aktivitásának. Szabadalmi igénypont: Eljárás a-amiláz előállítására Aspergillus oryzae penészgomba keményítőt, NaN03-ot, MgS04-ot, KH 2 P0 4 -ot, KCl-ot, FeS0 4 -ot, és malátacsíra extraktumot tartalmazó vizes tápoldatban levegőztetéssel, szubmerz körülmények között való tenyésztés útján, azzal jellemezve, hogy Aspergillus oryzae 3—9—15 mutánst (letétbehelyezési szarnia a Grúz Tudományos Akadémia Biológiai Intézeténél: 17) 50—90 g/liter keményítőt, 8—15 g/liter NaN03-ot, 0,4—1,5 g/liter MgS04 -ot, 0,2—1,2 g/liter KH 2 P0 4 -ot, 0,5 g/ liter KCl-ot, 0,001—0,08 g/liter FeS04 -ot, 0,2— 0,8 g/liter Mg(N03 ) 2 -ot, 0,1—0,7 g/liter Mg(H2 P0 4 ) 2 -ot és 20 térf.% 20%-os malátacsíraextraktumot tartalmazó vizes tápoldatban végezzük, a kapott fermentlevet szűrjük, a szűrletet 0,0003—0,003 mólos 6,5—7,5 pH-jú foszfátpufferrel dializáljuk, a kapott dializátumot dietilaminoetilcellulóz szorbensen bocsátjuk keresztül, és az a-amilázt előbb 0,04—0,09 mólos, 6,5—7,5 pH-jú foszfátpufferrel, majd 0,1—0,12 mólos, 6,5—7,5 pH-jú és 0,0003—0,001 mól/liter CaCl2 -ot tartalmazó foszfátpufferrel eluáljuk. A feladásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.6046/4 Zrínyi Nyomda, Budapest. F. v.: Bolgár Imre vezérigazgató
