166799. lajstromszámú szabadalom • Eljárás BM123alfa,béta és gamma-antibiotikumok előállítására

166799 IV. táblázat Szénforrás , hasznosítása Inkubáció: 10 nap Hőmérséklet: 32 °C Szénforrás Hasznosítás* adonit 0 1-arabinoz 0 glicerin 3 d-fruktóz 1 i-inozit 2 laktóz 0 d-mannit 0 szalicil 2 d-melibióz 0 d-raffinóz 0 ramnóz 0 maltóz 1 szacharóz 0 d-trehalóz 3 d-xilóz 0 dextróz 3 negatív kontroll 0 * 3 megfelelő hasznosítás 2 mérsékelt hasznosítás 1 csekély hasznosítás 0 nincs hasznosítás Kémiai összetétel Sejtfal típusa IV. típus V. táblázat Főbb összetevők mezo-DAP, arabinóz, galaktóz A találmány szerinti új antibakteriális anyagok termelését nem kívánjuk a feltüntetett mikroorganizmusokra korlátozni. Az antibakteriális anyagok előállítását a fenti mikroorganizmusok különféle módon, így gammasugárzással, ultraibolya-sugárzással, mustárgázzal, aktinofággal létrehozott mutánsaira is ki kívánjuk terjeszteni. Az előzetes vékonyréteg- és papírkromatográfiás vizsgálatok azt mutatták, hogy az NRRL 5646 számú Nocardia sp. aerób fermentációjával legalább három antibiotikum állítható elő. A táptalaj összetételére vonatkozó vizsgálatok azt mutatták, hogy kétféle sejttömeget állíthatunk elő, a gamma típusút, amely főleg BM123 y-t és kis mennyiségű BM123 a-t tartalmaz, valamint az alfa típusút, amely elsősorban BM123a-t termelt. BM123oc-t termelő fermentációs folyamat Az NRRL 5646 Norcardia sp. tenyésztését különféle folyékony táptalajokon végezhetjük. Az új antibakteriális anyagok előállítására legalkalmasabbnak bizonyultak a szénforrásként keményítőt, cukrot, melaszt, glicerint; nitrogénforrásként proteint, proteinhidrolizátumot, polipeptideket, aminosavat, kukoricalekvárt; szervetlen sóként kálium-, nátrium-, kalcium-, szulfát-, foszfát-, kloridionokat; nyomelemként bórt, molibdént, rezet tartalmazó 10 15 20 25 30 35 40 45 50 táptalajok. A táptalaj levegőztetését steril levegőnek a felszínre való befúvásával biztosítjuk. A táptalaj keverése mechanikus keverővel történik. Szükség esetén habzásgátló anyagot (disznózsírt, olajat) adunk a táptalajhoz. Inokulum készítése BM123x termeléséhez NRRI 5646 Norcardia sp-t tartalmazó inokulumot készítünk rázóedényben oly módon, hogy 100 ml steril táptalajt 500 ml-es edénybe viszünk, majd ferde agartenyészetről spórákat mosunk hozzá. A táptalaj összetétele az alábbi: marhahúskivonat 3 g Bacto-trypton 5 g élesztőkivonat 5 g keményítő 24 g dextróz 1 g víz ad 1000 ml nátriumhidroxiddal a pH-t 7-re állítjuk Az edényeket 25—29, célszerűen 28 °C hőmérsékleten 30—40 óra hosszat inkubáljuk, miközben az edényeket rotációs rázógépen erélyesen rázzuk. Ennek 100—100 ml-es részeit használjuk fel 1 liter és 12 liter fenti összetételű táptalaj beoltásához. A táptalajok 2, illetőleg 20 Uteres üveg fermentorokban vannak. A leoltott táptalajba 40—55 óra hosszat steril levegőt fúvatunk be. Az inokulumot a fermentorok leoltásához használjuk. Fermentáció BMl23x termelésére A BM123oc fermentálásához az alábbi táptalajt alkalmazzuk: Bacto-pepton 10 g dextróz 10 g melasz 20 g ferriammóniumcitrát 0,1 g kalciumkarbonát 1 g víz ad 1000 ml Az egyes tartályokat a fentiekben leírt inokulummal oltjuk le. Az oltóanyag térfogata a fermentorban levő táptalaj térfogatának 3—10%-át teszi ki. A táptalaj levegőztetését 0,2—0,8 liter steril levegő/ táptalaj liter/perc sebességgel végezzük. A keverés sebessége 50—200 fordulat/perc. A hőmérsékletet 25—29, célszerűen 28 °C-on tartjuk. A fermentációt 180—240 óra hosszat folytatjuk, majd a sejttömeget leszűrjük. 55 60 65 BM123x elkülönítése A fermentáció befejeződése után a BM123actartahnú sejttömeget leszűrjük. A szűréshez diatóma földet vagy egyéb ismert segédanyagot alkalmazunk. A micéliumpogácsát vízzel mossuk, és a szűrletet a mosóvízzel egyesítjük. Egy-egy szűrlet térfogata 30 litert tesz ki. A szűrlet pH-ját 6,5 értékre állítjuk. Nátriumfluorid hozzáadása után az elegyet mintegy 1 óra hosszat keverjük. A szuszpenziót diatóma földön vagy más segédanyagon szűrjük. A szűrletet IRC—50 (Na+) (0,16—0,3 mm szemcseméretű) tartalmú oszlopon perkoláljuk. (A gyengén savas gyantát Rohm és Haas, Philadelphia, Pennsylvania állítja elő.) A gyantaágy-4