166709. lajstromszámú szabadalom • Immunológiai diagnosztikai reagens

166709 terc-butil-, amil-, hexil-, heptil-, oktil-, nonil-, decil-, undecil- és dodecil-csoportot), monoaril-szubsztituált rövidszénláncú alkil-csoportot (pl. benzil- vagy a- vagy ß-feniletil-csoportot), monoaril-csoportot (pl. fenil-csoportot), morfolino-csoportot, piperidil-csoportot, morfolinil-helyettesített rövidszénláncú alkil-csoportot (pl. etil-morfolinil-csoportot), piperidil-helyettesített rövidszénláncú alkil-csoportot (pl. etil-piperidil-csoportot), di-(rövidszénláncú)-alkilamino-csoportot, rövidszénláncú alkil-csoportot, vagy piridil-helyettesített rövidszénláncú alkil-csoportot (pl. a-, ß- vagy y-metil- vagy -etil-piridil-csoportot) jelent. A karbodiimideket E. Schmidt, F. Hitzler és E. Lahde [Ber. 71, 1933 (1938)] általános módszere szerint úgy állíthatjuk elő, hogy a megfelelő tiokarbamidokat acetonban higany(Il)oxiddal oxidáljuk. A szimmetrikus tiokarbamidok előállítása során a megfelelő aminokat széndiszulfiddal reagáltatjuk. Az aszimmetrikus tiokarbamidokat aminők és izotiocianátok reakciójával állíthatjuk elő. A karbodiimideket a megfelelő karbamidokból is előállíthatjuk. Amint már a korábbiakban közöltük, a találmány szerinti eljárásban célszerűen vízben oldható karbodiimideket alkalmazunk. Ha a karbodiimid-vegyülethez terminális amino-csoport kapcsolódik, ez a vegyület pl. savaddíciós só képzésével alakítható vízoldható származékká. A sóképzéshez pl. halogénhidrogénsavakat, így sósavat, brómhidrogénsavat vagy jódhidrogénsavat, kénsavat, szulfonsavat, salétromsavat, foszfonsavakat és foszforsavat használhatunk fel. A tercier amino-csoportot tartalmazó karbodiimideket megfelelő kvaternerizálószerrel, pl. metiltoziláttal, metilbromiddal, metiljodiddal, benzilbromiddal, etiljodiddal, etilbromiddal, benziljodiddal, etiltoziláttal, metilszulfáttal, etilszulfáttal vagy hasonló anyagokkal reagáltatva alakíthatjuk a megfelelő kvaterner amino-csoportot tartalmazó, vízben oldódó termékekké. A korábban példaként megemlített vegyületeket egyaránt felhasználhatjuk a találmány szerinti eljárásban kondenzálószerként. A szerológiailag determináns anyagot és a hordozóanyagot a találmány szerint vizes közegben, előnyösen szobahőmérsékleten (kb. 20—25 C°-on) reagáltatjuk egymással, a reakciót azonban kb. 5—40 C°-on is végrehajthatjuk. A szerológiailag determináns anyag és a hordozóanyag kémiai kapcsolódásának biztosítása érdekében megfelelő mennyiségű ko.ndenzálószert használunk fel, és így biztosítjuk, hogy az összes lehetséges amid-kötés kialakuljon. Kondenzálószerként általában a részecskék súlyára számítva kb. 0,05—2,0% vízben oldódó karbodiimid-vegyületet, rendszerint kb. 1 súly% karbodiimid-vegyületet használunk fel. A reakcióelegy pH-ja igen döntő jelentőségű tényező. Az elegy pH-ját olyan értéken kell tartam, hogy a fehérjejellegű reagensek ne denaturálódjanak. A reakciót általában 5—7,5 pH-értékű közegben végezzük. A közeg pH-ját megfelelő ismert szervetlen puffer-rendszer, pl. foszfátpuffer vagy hasonló anyag felhasználásával tartjuk a kívánt értéken. A reakció kb. 5 perctől kb. 24 óráig terjedő időt vesz igénybe. A reakció rendszerint kb. 4—5 óra alatt ér véget. A kapott termék vízben oldhatatlan anyag, amely a felhasznált rendszertől és a szerológiailag determináns anyag stabilitási viszonyaitól függően kb. 5,0—8,5 pH-értékű vizes szuszpenzió formájában képződik. A termék fajsúlya közel azonos a víz fajsúlyával, ennek következtében a termék vízzel stabil szuszpenziót képez. A terméket pl. centrifugálással különíthetjük el. Fehér, 5 bizonyos mértékben tixotróp, viszkózus, agyagszerű anyagot kapunk. Kémiai szempontból a termék szerológiailag közömbös, diszkrét hordozóanyag-részecskéken amid-kötéssel kötött szerológiailag determináns anyag-réteg. A termékben szerológiailag determináns anyag-10 ként egyetlen aktív anyag van jelen; az esetlegesen jelenlevő szennyezőanyagok nem befolyásolhatják a reakció specifitását. A reagensekből előállított valamennyi termék megfelel a korábbiakban ismertetett követelményeknek, 15 azaz megfelel a találmány céljának. A találmány szerint pl. a következő termékeket kapjuk: 45% butadién- és 55% sztirol-monomerből felépített, kb. 1—5 súly%, általában kb. 3 súly% mennyiségű karboxil-csoportot tartalmazó, karboxilezett buta-20 dién-sztirol-kopolimerre amid-kötéssel kapcsolt humán koriogonadotropin; 45% butadién- és 55% sztirol-monomerből felépített, kb. 1—5 súly%, általában kb. 3 súly% mennyiségű karboxil-csoportot tartalmazó, karboxilezett butadién-sztirol-kopolimerre amid-kötés-25 sei kapcsolt humán albumin. A kapott termékeket immunológiai elveken alapuló speciális diagnosztikai vizsgálatokban használhatjuk fel. A termékeket a vizsgálattól függően bármilyen koncentrációban felhasználhatjuk, a termékeket azonban 30 előnyösen kb. 1,0—2,5 súly%, célszerűen 1,3 súly% koncentrációban alkalmazzuk. így pl. a humán koriogonadotropinból (HCG) és hordozóanyag-részecskékből felépített anyagot nőknél terhesség kimutatására használhatjuk fel. A vizsgálatot pl. úgy végezzük, hogy 35 egy tiszta üveglemezre egy csepp vizsgálandó vizeletet helyezünk, ezt egy csepp humán koriogonadotropin-antiszérummal keverjük össze, majd a keverékhez egy csepp vizes HCG-hordozóanyag-szuszpenziót adunk. 2 perc elteltével meghatározzuk a vizsgálat eredményét. 40 A vizsgálat megbízhatósága kb. 90—98%. A vizsgálat előnyei a következők: egyszerű, gyors, specifikus, pontos, és téves pozitív eredmények nem észlelhetők. Ez annak tulajdonítható, hogy a nem-specifikus rétegződés által kiváltott egyéb fehérjék interferáló 45 hatása kizárt. A hordozóanyag-részecskékre felvitt gamma-globulint pl. reumatoid artritisz kimutatására használhatjuk fel. A vizsgálatot pl. úgy végezzük, hogy egy üveglapra pufferolt vizsgálandó szérumot helyezünk, és a szérumot 50 egy csepp gamma-globulin-hordozóanyag rendszert tartalmazó vizes szuszpenzióval keverjük össze. A vizsgálat eredménye egy percen belül észlelhető. A vizsgálat megbízhatósága kb. 80%. 55 Az immunológiai vizsgálati eljárásokban felhasználható reagenseket általában kereskedelmi célokra megfelelő csomagolásban szerelhetjük ki. A reagenseket pl. két különböző tartályt tartalmazó diagnosztikai reagenscsomagolásban hozhatjuk forgalomba, ahol az egyik 60 tartályban a megfelelő antiszérum, míg a másikban a szerológiailag közömbös hordozóanyaghoz amid-kötéssel kapcsolódó, szerológiailag determináns anyag vizes szuszpenziója foglal helyet. A szerológiailag közömbös hordozóanyaghoz amid-kötéssel kapcsolt, sze-65 rológiailag determináns anyag koncentrációja tetszés 3