166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
73 166686 74 mossuk. Nagyvákuumban káliumhidroxid és foszforpentoxid felett végzett szárítás után a tiszta vegyületet kapjuk, melynek vékonyrétegkromatogramban szilikagélen kloroform-metanol (8 : 2) rendszerben Rf értéke 0,25, Rf45 =0,48. 8. Bmp-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Ile-Leu-Gly-OH 3,89 g Bmp(TRI)-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys(TRI)-Ile-Leu-Gly-OH vegyületet 200 ml dimetilformamidban oldunk melegítés közben, majd szobahőmérsékletre való lehűlés után 6,35 g jód 1 liter metanollal készített oldatába csepegtetjük, erős keverés mellett. Ezután az oldatot egy órán át tovább keverjük, majd 0°-ra hűtjük, és 1,0 n nátriumtioszulfátoldattal színtelenítjük. Vízlégszivattyúval létesített vákuumban és nagyvákuumban körülbelül 50 ml-es térfogatra való bepárlás után étert adunk hozzá; a kivált csapadékot 0°-on 50—50 ml vízzel kétszer eldörzsöljük, majd káliumhidroxid és foszforpentoxid felett szárítjuk. A kapott terméket Craig-extrakcióval tisztítjuk metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid (5:2:3:1) rendszerben a puffer ugyanaz, mint az 1. példában. Az egység frakciókat (K = 1,38) egyesítjük, bepároljuk és 35°-on nagyvákuumban 4 órán át végzett szárítással ammóniumacetát-mentessé alakítjuk. Az ily módon kapott tiszta peptid-származék Rr értéke vékonyrétegkromatogramban szilikagélen vizsgálva, etilacetát-piridin-víz (40 : 20 : : 40) rendszerben 0,23, Rf43C = 0,28. 9. Bmp-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Ile-Leu-Gly-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 AH-Thr(tBu)-Tyr(tBu)-Thr(tBu)-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr(tBu)-Phe-Pro-Gln-Thr(tBu)-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 védett dokozapeptidamid 66 mg-ját (vö. 4. példa 47. pont) valamint 41 mg Bmp-Gly-Asn-Leu-Ser(tBu)-Thr(tBu)-Cys-Ile-Leu-Gly-OH vegyületet melegítés közben 2 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot szobahőmérsékletre hűtjük, 8,5 mg N-hidroszukcinimidet, valamint 11,4 mg diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá, majd 4 órán át 45°-on keverjük. Ezután az oldatot 20 ml peroxidmentes éterbe öntjük és a kivált fehér csapadékot szárítás után Craig-extrakcióval tisztítjuk; a termék 88 mg-ját a megosztó készülék harmadik és negyedik csövébe adagoljuk (fázistérfogat 3—3 ml), az alkalmazott oldószer-rendszer metanol-puffer-kloroform-széntetraklorid (11 : 3 : 7 : 6), a puffer megegyezik az 1. példában alkalmazottal. A multiplikatív megoszlást összesen 150 lépcsőn át végezzük (rmax =59; K=0,65). Az 56—67. frakciók bepárlásával kapott termékből az ammóniumacetátot nagyvákuumban 40°-on szublimálással eltávolítjuk; így a tiszta, védett dotriakontapeptidamidot kapjuk. Az Rf -értékek vékonyrétegkromatogramban szilikagélen a következők: 10 15 20 25 30 35 40 45 50 55 60 65 Rf45 = 0,41; terc-amilalkohol-propanol-víz (32 : 32 : 36) rendszerben Rf = 0,51. Szabadalmi igénypontok 1. Eljárás az 1 általános képletű S CH2 I 12 3 4 5 6 R-CH-CO-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 -Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-24 25 26 27 28 29 30 31 32 -Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (I) peptidek — mely általános képletben X Val-, Nva-, Leu-, lie-, Nie- vagy Abu-csoportot jelent és R jelentése hidrogénatom, egy szabad vagy legfeljebb 5 szénatomos alkanoil csoporttal acilezett aminocsoport, és ezek savaddíciós sóinak előállítására, azzal jellemezve, hogy a) valamely I általános képletű vegyületből, ahol R és X jelentése a fent megadott és melyben legalább egy amino- vagy karboxilcsoport lehasítható védőcsoporttal védett, a védőcsoportot vagy védőcsoportokat lehasítjuk, vagy b) valamely II általános képletű SH OJ7I2 | 1 23 45 6789 10 11 R-CH-CO-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-X-Leu-Gly-Thr-12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 -Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-24 25 26 27 28 29 30 31 32 -Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 (II) vegyületet, ahol R és X a fent megadott jelentésű és ahol a merkaptocsoportok szabadok, az —SH csoportoknak —S—S— csoportokká való oxidálására ismert oxidálószerekkel reagáltatunk, vagy, ha a merkaptocsoportok tritilcsoporttal védettek, jóddal reagáltatunk, és kívánt esetben a szabad Na -aminocsoportot tartalmazó vegyületeket valamely legfeljebb 5 szénatomos alkánsavval, vagy ennek egy reakcióképes származékával reagáltatva legfeljebb 5 szénatomos N^-alkanoilszármazékká alakítjuk át, és kívánt esetben a keletkezett vegyületeket savaddíciós sóikká alakítjuk át. (Elsőbbsége: 1968. november 20.) 2. Az 1. igénypont a) eljárásváltozatának foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan I általános képletű vegyületekből indulunk ki, melyek képletében R jelentése hidrogénatom vagy aminocsoport, X jelentése az 1. igénypontban megadott és legalább egy aminovagy karboxilcsoport lehasítható védőcsoporttal védett. (Elsőbbsége: 1968. október 15.) 3. Az 1. igénypont a) eljárásváltozatának vagy a 2. igénypont szerinti eljárás foganatosítási módja, azzal jellemezve, hogy olyan I általános képletű vegyületekből indulunk ki, melyekben X, R jelentése az 1. igénypont-37
