166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
7 166686 8 Ac acetilcsoport TFA trifluorecetsav Abu oc-aminovajsav Bmp ß-merkaptopropionil-csoport A 8. aminosavként a megadott jelentésű X aminosavat tartalmazó N-terminális (1—10) dekapeptidet, pl. az 1—4 és 5—10, az 1—5 és 6—10, az 1—6 és 7—10, vagy az 1—7 és 8—10 szekvenciákból építhetjük fel, amint az az 1—8. ábrákon látható; használhatunk azonban más töredékeket is az 1—10 szekvencia felépítésére. A Cys'-csoport oc-aminocsoportjának védésére előnyösen terc-butiloxikarbonil-csoportot, vagy ezzel egyenértékű, savas hidrolízissel lehasítható csoportot használunk, vagy ha N^-acilezett dotrikontapeptidet állítunk elő, a megfelelő acil- pl. acetilcsoportot. Emellett célszerűen olyan merkapto védőcsoportokat alkalmazunk, melyek szemben a savas hidrolízissel lehasítható Na-aminovédőcsoportokkal (pl. terc-butiloxikarbonil-csoportokkal) szelektíven hasíthatok le, pl. benzil- vagy tritilcsoportokát. A dekapeptid terminális karboxilcsoportját nem feltétlenül szükséges védeni, pl. nem kell, ha a kondenzációt azid- vagy anhidridmódszerrel hajtjuk végre. Védhetjük azonban ezt a csoportot pl. a fentiek szerint, pl. metanollal vagy etanollal (az észtercsoport lehasítását híg nátronlúggal végezzük), vagy benzilalkohollal vagy analógjaival (az észter-csoport lehasítása pl. nátriummal történik, folyékony ammóniás közegben) észterezve. A közbenső termékek aminocsoportjamak védése a szokásos védőcsoportokkal, pl. karbobenzoxi-, tritil-, terc-butiloxikarbonil- vagy 2-p-difenil-izopropiloxikarbonil-csoporttal történik. A közbenső termékek karboxilcsoportjait, ha szükséges, a szokásos módon észterezzük. A Ser- és Thr-csoportok hidroxilcsoportjait éterezéssel, pl. terc-butanollal vagy ezzel egyenértékű szerekkel éterezve védhetjük. A p-nitrobenzilészter- és benzilészter-csoportokat nátriummal folyékony ammóniás közegben, vagy palládiumszén katalizátor jelenlétében végzett hidrogenolízissel hasítjuk le, a karbobenzoxicsoportot ugyancsak hidrogenolízissel, az N-tritilcsoportot vizes ecetsavval, a terc-butiloxikarbonilcsoportot trifluorecetsavval, a 2--(p-bifenilil)-izopropiloxikarbomlcsoportot vizes ecetsavval, vagy pl. ecetsav-82,8%-os hangyasav-víz (7:1:2 eleggyel (lásd 1554051 számú francia szabadalmi leírást) hasítjuk le. A p-nitrobenzil- vagy metilésztert hidrazinhidráttal hidraziddá alakíthatjuk át. Híg nátriumhidroxidoldattal a metil- vagy etilésztercsoportot hidrolizáljuk. A terc-butilésztercsoportot trifluorecetsavval hasítjuk le, hasonlóképpen a terc-butilétert is. Az S-tritilcsoportokat merkuriacetáttal és kénhidrogénnel távolítjuk el, az S-benzilcsoportot nátriummal folyékony ammóniás közegben, amikoris az adott esetben jelenlevő benzil- vagy p-nitrobenzilészter-csoportokat egyidejűleg lehasítjuk. A diszulfid gyűrűzárás pl. 1,2-dijódetánnal oxidálva, az S-tritil-védett vegyületek oxidációja jóddal metanolos közegben történik. Az N-terminális szekvenciával kötendő, 11—32, illetve 11—28. aminosavakat tartalmaz ó C-terminális szekvenciát pl. a 11—16, 17—20, 21—28 és 29—32 szekvenciákból állítjuk össze, amint az a 9. ábrán látható. Ezen a vázlaton a Thr- és Tyr-csoportok hidroxilcsoportjait védjük, de ez nem feltétlenül szükséges. Más részszekvenciák is egyesíthetők, és más védőcsoportok is használhatók. A 10. ábra a 11—16 aminosavakból álló hexapeptid (hidrazin formában) felépítését mutatja. Ezt azid-módszerrel kapcsolhatjuk a 17—28 vagy 17—32 szekvenciákhoz. 5 A 17—28 szekvenciát felépíthetjük a 17—20 és 21—28 részekből azid-módszerrel. Ali. ábra a 17—20 aminosavakból álló tetrapeptidhidrazid szintézisét, a 12. ábra a 21—28 oktapeptid felépítését mutatja. A két szekvencia összekapcsolása után 10 az a-amino védőcsoportot lehasítjuk (a karbonbenzoxicsoportot hidrogenolízissel palládiumszén katalizátor jelenlétében) és az így keletkezett, védett oldalláncokkal rendelkező dodekapeptidet azid-módszerrel a 11—16 hexapeptidhidraziddal (10. ábra) kondenzáljuk. 15 Az így keletkezett 11—28 szekvenciát kapcsolhatjuk a 29—32 aminosavakból álló tetrapeptidamiddal (melynek előállítása a 13. ábrán látható), pl. a Weygand— Wünsch-eljárással. így nyerjük a 11—32 védett dokozapeptidamidot. Erről lehasíthatjuk az a-aminovédő-20 csoportot (a karbobenzoxicsoportot pl. hidrogenolitikusan, a DPC-t 90%-os ecetsavval vagy ecetsav-82,8%os hangyasav-víz (7:2: 1) eleggyel) és az így keletkezett szabad a-aminocsoportot tartalmazó vegyületet az ecetsav eltávolítása után az N-terminális dekapeptid-25 del (1—8. ábra) kapcsoljuk, pl. a vegyes anhidrid- az aktivált észter (OSN)- vagy a Weygand—Wünschmódszerrel. Kapcsolhatjuk azonban a szabad C-terminális karboxilcsoportot tartalmazó 11—28 szekvenciát is az 30 a-aminovédőcsoport említett módon történő lehasítása után az N-terminális dekapeptiddel, a vegyes anhidridmódszerrel, és az így keletkezett terméket a 29—32 tetrapeptidamiddal kondenzáljuk, pl. a Weygand—Wünschmódszerrel. 35 Másik lehetőség a 11—32 C-terminális szekvencia felépítésére, hogy azt pl. a 11—19 és 20—32 szekvenciákból állítjuk össze, amint az a 14. és 15. ábrákon látható, előnyösen a vegyes anhidrid-módszerrel vagy Weygand—Wünsch szerint. 40 A védett dotriakontapeptidamidról a védőcsoportokat pl. trifluorecetsavval vagy tömény sósavval hasítjuk le. A b) eljárási változatnál felhasználandó, szabad, illetve tritilcsoporttal védett SH-csoportokat tartalmazó 45 dotriakontapeptidet a fent leírt védett dotriakontapeptidhez hasonlóan állítjuk elő azzal a különbséggel, hogy a védett SH-csoportokat a szintézis befejeztéig megtartjuk. Majd miután az összes fenti védőcsoportot eltávolítjuk a védett dotriakontapeptidról, az SH-védő-50 csoportokat lehasítjuk, illetve a tritilcsoporttal védett vegyületet közvetlenül oxidáljuk, a fentiek szerint. Az eljárás c) kiviteli változata szerinti szintézis főleg az acilezett aminocsoportokkal rendelkező végtermékek előállítására, vagy mindenekelőtt olyan oc-dezamino 55 vagy a-acilezett peptidek előállítására szolgál, melyekben a 18. aminosav, a Lys, az oldalláncon acilezhető aminocsoportot nem tartalmazó aminosavval, pl. glicinnel, vagy a sertéskalcitonin 18. aminosavjával, aszparaginnal van helyettesítve. Az Na -acilezett dekapep-60 tidet, pl. az 5 K ábra szerint állíthatjuk elő, azonban a kezdeti aminovédőcsoportot a megtartandó acilcsoporttal cseréljük ki. A szintézis eljárásai a fentiekben leírtaknak felelnek meg. A feldolgozás módjától függően az új vegyületeket 65 bázisként vagy sóik alakjában kapjuk. A sókból önma-4
