166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
53 166686 54 59. BOC-Nle-Leu-Gly-OH 3,25 g, 8. pontban leírt észtert 100 ml metanolban oldunk, és 21 ml 0,53 n nátriumhidroxidoldatot adunk hozzá. Másfél órás keverés után az oldatot megsavanyítjuk, és vákuumban bepároljuk. A maradékot vízben oldjuk, és etilacetáttal extraháljuk. A szerves fázist szárítjuk és bepároljuk. A termék 71—72°-on olvad. [a]g> = - 28,4° (c = l, dimetilformamidban). Szilikagéles lemezen futtatva Rf7 =0,75. 60. H-Nle-Leu-Gly-OH. trifluoracetát 2,42 g BOC-Nle-Leu-Gly-OH vegyületet 24 ml 90%os trifluorecetsavban oldunk, a 16. pontban leírt módon. Egy óra múlva az oldatot bepároljuk. A termék 94— 96°-on olvad. Szilikagélen történő vékonyrétegkromatográfiás vizsgálatban Rf , = 0,56. 61. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nle-Leu-Gly-OH 1 g, 56. pontban előállított hidrazidot 35 ml dimetilformamidban oldunk és a 13. pontban leírt módon 0,85 ml 3,64 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 0,155 ml izoamilnitrittel azidot képezünk. Az azidoldatot 0,955 g H-Nle-Leu-Gly-OH és 0,324 g trietilamin 25 ml dimetilformamidos oldatához adjuk. A reakcióelegyet bepároljuk, és kétszer etilacetát-citrosavoldat eleggyel elkeverjük. A termék szilikagéles vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf5 =0,71 értéket ad. 62. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Nle-Leu-Giy-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 440 mg 61. pontban előállított BOC-dekapeptidet és 109 mg N-hidroxiszukcinimidet 35 ml dimetilformamidban oldunk, az oldatot — 22°-ra hűtjük, 98 mg diciklohexilkarbodiimidet csepegtetünk hozzá, és még 1,5 órán át — 22"-on, és 3,5 órán át 0° -on keverjük. Ezután ismét — 22°-ra hűtjük és 850 mg 43. pontban leírt dokozapeptidamidot adunk hozzá, majd a pH-t trietilaminnal 6,6-ra állítjuk. 7 napig 0°-on és 5 napig 22°-on tartjuk, majd az oldatot vákuumban szárazra pároljuk, és a maradékot szilikagélen n-butanol-jégecet-víz (4:1:5) rendszerben kromatografáljuk. A termék szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során 0,29 Rf5-értéket ad. 2. példa H-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp-Phe-Asn-Lys-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2. acetát (Val8 -kalcitonin M. acetát) 70 mg BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOQ-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-5 -Ala-Pro-NH 2 vegyületet 3 ml jéghideg 95%-os tri- -fiuorecetsavban oldunk és az oldatot 25°-ra melegítjük. Egy óráig ezen a hőmérsékleten tartjuk, majd 70 ml jéghideg éterbe öntjük, és a keletkezett csapadékot leszívatjuk. Ezt éterrel többször mossuk, szárítjuk, majd *0 5%-os ecetsavoldatban oldjuk. Ezután a trifluoracetát-ionok eltávolítása végett egy Merck II (gyengén bázikus, acetátciklusú) ioncserélő oszlopon szűrjük. Az eluátumot liofilizáljuk. Az így keletkezett dotriakontapeptid vékonyrétegkromatográfiásan (alumíniumoxid lemezek, 15 52 és 45 rendszerben) nem teljesen egységes. Ellenáramú megoszlatással n-butanol-ecetsav-víz (4: 1:5) rendszerben tisztíthatjuk. Vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során szilikagélen Rf6 = 0,45; alumíniumoxidon Rf^ = 0,53; Rf45 =0,42. 20 A kiindulási anyagot a következőképpen állíthatjuk elő: 1. BOC-Val-Leu-Gly-OEt 25 4,35 g BOC-Val-OH vegyületet 50 ml tetrahidrofuránban oldunk, és az 1. példa 58. pontjában leírt módon, vegyes anhidridet képezünk, majd ezt 5,06 g H-Leu-Gly-OEt vegyülettel (1. példa 57. pont) kapcsoljuk. 30 A termék 112—113°-on olvad. [a]f,° = -27,3° (c = l, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rfl = 0,7. 2. BOC-Val-Leu-Gly-OH BOC-Val-Leu-Gly-OEt vegyületet az 1. példa 59. pontjában leírt módon elszappanosítunk. A termék 40 78°-on olvad. [a]g>= -27,4° (c = l, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf7 = 0,71. 3. H-Val-Leu-Gly-OH. trifluoracetát 2,9 g BOC-Val-Leu-Gly-OH vegyületet az 1. példa 50 60. pontjában leírt módon 24 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, a termék 75°-on olvad. Szilikagéles lemezen az Rf7 -érték = 0,5. 4. BOC-Cys-Gly-Asn-Leu-Ser-Thr-Cys-Val-Leu-Gly-OH 1,0 g, az 1. példa 56. pontjában leírt hidrazidot az 1. példa 61. pontja szerint aziddá alakítunk át, és ezt 0,933 g H-Val-Leu-Gly-OH. trifluoracetát vegyülettel kondenzáljuk. A termék szilikagéles lemezen Rf5 = 0,71 65 értéket mutat. 27
