166686. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új, hipokalcémiás hatású dotriakontapeptidamidok előállítására
47 166686 48 34. BOC-Tyr-Thr-ONB 69,68 g H-Thr-ONB hidrokloridot 480 ml acetonitrilben szuszpendálunk, 32,84 ml trietilamint adunk hozzá, - 5°-ra hűtjük és 67,52 g BOC-Tyr-OH vegyületet és 960 ml hideg acetonitrilt, majd 49,44 g diciklohexilkarbodiimidet adunk hozzá. A szuszpenziót 1 órán át 3c-on keverjük és a 26. pontban leírt módon feldolgozzuk. A dipeptidszármazékot olajként izoláljuk. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rn = 0,60. 35. H-Tyr-Thr-ONB. hidroklorid 121 g BOC-Tyr-Thr-ONB vegyületet 1537 ml metilénkloridban és 384 ml nitrometánban oldunk, és a továbbiakban a 6. pont szerint járunk el. 45 perces sósav átáramoltatás után a szuszpenziót 1 órán át keverjük, majd szűrjük. A termék 226—227°-on olvad. Rfl érték =0,35, szilikagélen. 36. Z-Thr-Tyr-Thr-ONB 57,4 g Z-Thr-NH-NH2 vegyületet 320 ml dimetilformamidban oldunk, és 220 ml 1,953 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 29 ml izo-amilnitrittel a 13. pontban leírt módon azidot képezünk. Az azidoldatot 98 g H-Tyr-Thr-ONB hidroklorid 760 ml dimetilformamidos és 91 ml trietilaminos oldatához adjuk. A tripeptidszármazékot etilacetát-hexán elegyből kikristályosítjuk. Op.: 111—118°. [a]f,° = -4,4° (c =2, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rn = 0,6. 37. Z-Thr-Tyr-Thr-NH-NH2 114,2 g fenti tripeptidésztert 480 ml metanolban oldunk, és a 14. pontban leírt módon 48 ml hidrazinhidrátot csepegtetünk hozzá. 4 óra múlva 1440 ml etilacetátot adunk hozzá, és további 1,5 óra után a szuszpenziót leszűrjük. A maradékot 20 órán át 1 liter etilacetáttal keverjük. A termék 219—221°-on olvad. MD= —6,6° (c = 2, dimetilformamidban). Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás futtatás során Rf6 = 0,85. 38. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-NH-NH-BOC 89 g Z-Thr-Tyr-Thr-NH-NH2 vegyületet 890 ml dimetilformamidban szuszpendálunk és azidot képezünk a 13. pontban leírtak szerint, 197 ml 2,02 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 28,8 ml izo-amilnitrittel. Az azidoldatot 39,3 g H-Gln-NH-NH-BOC és 56,2 ml trietilamin 750 ml dimetilformamidos, — 10°-ra hűtött oldatához adjuk. 4 nap múlva 720 ml metanolt és 720 ml étert csepegtetünk a reakcióelegyhez és a szuszpenziót 2 órán át keverjük. Ezután a kristályokat leszűrjük és kétszer 400 ml 0,05 n sósavval keverjük. A termék 216—218°-on olvad. [a]g»= -8,3° (c=2, dimetilformamidban). Rfl0 = 0,8, szilikagéles lemezen. 39. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-NH-NH2 53,5 g 38. pontban leírt származékot 110 ml 90%-os trifluorecetsavban oldunk, 1,5 órán át keverjük, majd 5 a 16. pontban leírtak szerint 880 ml étert adunk hozzá. A csapadékot 200 ml metanol-éter (1 : 4) eleggyel keverjük (kétszer). A termék olvadáspontja 200—203°. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf5 =0,75. [a&°= -4,6? (c = 2, dimetil-10 formamidban). 40. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys (BOC)-Phe-OH 15 9,5 g Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-NH-NH2 vegyületet 95 ml dimetilformamidban szuszpendálunk és a 13. pontban leírtak szerint 11,94 ml 2,122 n tetrahidrofurános sósavoldattal és 2,28 ml izo-amilnitrittel azidot képezünk. 20 8,6 g H-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys(BOC)-Phe-OH vegyületet oldunk 210 ml dimetilformamidban és 7,5 ml trietilaminban. Az oldatot — 10°-ra hűtjük és hozzáadjuk az azidoldathoz. 3 napig 0°-on reagáltatjuk, majd leszűrjük, a szűrletet bepároljuk és a maradékot 300 ml 25 0,1 n sósavval elkeverjük. A terméket dimetilformamid-0,1 n sósav (1 : 3,5) elegyből kristályosítjuk ki. Op.: 206°. [«]% = -19,3° (c = l, dimetilformamidban). Szilikagéles vékonyrétegkromatogramon Rf5 = 0,87. 30 41. H-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 . hidroklorid 32 g 25. pontban leírt BOC-tridekapeptidamidot 35 1200 ml dimetilformamidban és 12 ml 4 n sósavban oldunk, és a 2. pontban leírt módon 20 órán át hidrogénezzük. A nyers terméket Craig-extrakcióval, n~ -butanol-jégecet-víz (4:1:5) rendszerben tisztítjuk. K=0,11. A termék [a£°=-39,4° (c = l, dimetil-40 formamidban) értéket mutat. Szilikagélen végzett vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat során Rf6 = 0,2. 42. Z-Thr-Tyr-Thr-Gln-Asp(OtBu)-Phe-Asn-Lys 45 (BOC)-Phe-His-Thr-Phe-Pro-Gln-Thr-Ala-Ile-Gly-Val-Gly-Ala-Pro-NH2 7,3 g a 40. pontban leírt védett nonapeptidet 75 ml dimetilformamidban oldunk, 1,33 g N-hidroxiszukcin-50 imidet adunk hozzá és az oldatot — 22°-ra hűtjük. 1,195 g diciklohexilkarbodiimid 15 ml dimetilformamidos, ugyanígy hűtött oldatát csepegtetjük hozzá (A oldat). Miután 1 óráig — 22°-on és 4 órán át + 4°-on kevertük, a szuszpenziót ismét — 22°-ra hűtjük. Ezután 55 az A oldathoz 6,9 g 41. pontban leírt tridekapeptidamid 80 ml dimetilformamidos, trietilaminnal 6,7—7,0 pH értékre beállított és ugyancsak hűtött oldatát adjuk. 14 napos reakcióidő után a szuszpenziót egy új 0,73 g, 40. pontban leírt nonapeptidból készített A oldathoz 60 adjuk. További 7 napig 0°-on reagáltatjuk, a szuszpenziót leszűrjük és a szűrletet vákuumban szárazra pároljuk. A maradékot szilikagéles oszlopkromatográfiával, n-butanol-jégecet-víz (4:1:5) rendszerben tisztítjuk. A termék Rf5 értéke 0,32, szilikagéles vékonyré-65 tegen. 24
