166530. lajstromszámú szabadalom • Eljárás antipepszin hatású pepsztrationok előállítására
7 166530 8 5. példa 6,0% glükózt, 2,0% glicerint, 1,5% fölözött tejet, 1,5% kazeint; 5,7% szójabab-lisztet, 0,1% K2 HP0 4 -t, 0,3% NaCl-t és 0,1% MgS04 -7H 2 0-t tartalmazó 130 liter tápközeget (pH =5,5) Streptomyces argenteolus var. toyonakensis ATCC 21468 törzzsel oltunk be, majd az 1. példában megadott körülmények között 137 órán keresztül inkubálunk. 110 liter fermentléhez (antipepszin-aktivitása megfelel 132 g pepsztatinnak) hozzáadunk 7 kg szűrési segédanyagot, az elegy pH-ját híg kénsavval 2;0-ra állítjuk be, majd szűrjük. A szűrés után 33 kg nedves micéliumot és 75 liter szűrletet különítünk el. A micéliumhoz hozzáadunk 83 liter abszolút metanolt, a szuszpenziót 40 percen keresztül keverjük, majd szűrjük és a szilárd fázist 2 X 40 liter metanollal mossuk. Ilyen módon 140 liter vizes metanolos eluátumot kapunk. 75 liter fentiekben előállított szűrt fermentléhez hozzáadjuk a 35 liter n-butanolt, az elegyet 15 percen keresztül keverjük, majd a fázisokat elkülönítjük. Ilyen módon 37 liter butanolos fázist és 73 liter vizes fázist kapunk. A fentiekben kapott 140 liter vizes metanolos eluátumot vákuumban 27 literre bepároljuk, majd a fenti 37 liter butanolos extraktummal elegyítjük. Az elegyet a vizes fázis elkülönítésére centrifugáljuk: ilyen módon 35 liter butanolos extraktumot kapunk. A butanolos extraktum pH-ját 3,0-ra állítjuk be, majd vákuumban 1,0 liter térfogatra bepároljuk. A szirupsűrűségű párlási maradékot 15 liter vízbe csepegtetjük, majd az elegyet 60 percen keresztül keverjük. A kivált csapadékot szűrjük, vízzel mossuk és 60—70 C°-on megszárítjuk. A kapott 158 g súlyú új pepsztatin-származék antipepszin-aktivitása (ID50 -értéke) 0,072y. A fentiek szerint előállított port az 1. példában ismertetett módon metanolban észterezve kristályos fehér por formájában 62 g új pepsztatin-származék metilésztert kapunk. A termék ID50 -értéke 0,05y, bomláspontja 250—252 C°, forgatása («)r>° — -- 90,6° (c = 0,5, ecetsav). A vékonyrétegkromatográfiás vizsgálat szerint a termék főként új pepsztatin-származék metilésztert (Rf = 0,39) és nyomokban pepsztatin metilésztert tartalmaz. 30 g fentiek szerint előállított új pepsztatin-származék -metilésztert 450 ml 0,2 N nátriumhidroxid-oldatban 2 órán keresztül 60 C°-on elszappanosítunk. Oldószer: 90%-os vizes metanol. A fenti idő eltelte után a reakcióelegy pH-ját híg sósavval 8,5-re állítjuk be, majd az elegyet 150 ml térfogatra pároljuk be. A csapadékot szűrjük, metanollal mossuk és vákuumban szárítjuk. Ilyen módon fehér por formájában 17,9 g pepsztatin B és C -nátriumsót kapunk. A termék bomláspontja 245— 249 C°, aktivitása, ID50 =0,05y, fogatása (a)g ) = -84° (c = 1, metanol). A titrálás során 700 mg termék 10,1 ml X 0,1 N sósavat fogyaszt. Elemi összetétele: a C35 H 61 N 5 0 9 Na képletre: számított: C 58,22% H8,93% N 9,70% O 19,94% Na 3,18%; talált: C 58,14% H8,99% N 9,89% 0 19,81% Na 3,08%, 6. példa 6,0% glükózt, 2,0% glicerint, 4,2% kazeint, 1,0% peptont, 0,1% K2 HPO r t, 0,3% NaCl-t és 0,1% 5 MgSOá • 7Ha O-t tartalmazó 130 liter tápközeget'(pH = = 7,0) Streptomyces argenteolus var. toyonakensis AÍCC 21468 törzzsel oltunk be és az 1. példában ismertetett körülmények között 132,5 órán keresztül inkubálunk. A feldolgozáskor a 130 liter fermentlé 111 g pepsz-10 tatinnak megfelelő mennyiségű hatóanyagot tartalmaz. A fermentlevet az 1. példában megadott módon feldolgozva 133 g új pepsztatin-származék nyersterméket állíthatunk elő. A termék antipepszin-aktivitása ID50 = = 0,076 y. 15 A fentiek szerint előállított sárga port az 1. példában ismertetetteknek megfelelően kezeljük s így 58,5 g pepsztatin B és C metilésztert kapunk. A termék antipepszin-aktivitása, ID50 =0,051 y, bomláspontja 255—256 C°, 20 forgatása, (oc)J,0 = — 95,5° (c = 0,5, ecetsav). Az anyag a rétegkromatográfiás vizsgálatok szerint 1: 1 arányban tartalmaz foltokat 0,35 és 0,39 Rf -értékeknél, a 0,42 Rr értéknél azonban nem található folt. Az így készített preparátum tehát 1: 1 arányban tartalmaz pepsztatint 25 és találmány szerinti új pepsztatin-származékokat. 7. példa 30 A 2. példában ismertetett eljárás szerint előállított szabad savformájú új pepsztatin-számazékot melegítés közben feloldunk 100 ml abszolút metanolban és az oldathoz hozzáadunk 0,2 ml tömény kénsavat. Az elegyet vízfürdőn 6 órán keresztül visszafolyató hűtő alatt for-35 raljuk, majd vákuumban 50 ml térfogatra bepároljuk. A kivált csapadékot szűrjük, etanollál mossuk és szárítjuk. Ilyen módon 1,6 g port kapunk. A port 100 ml ab' szolút metanolban átkristályosítva fehér kristályos por formájában 1,15 g új pepsztatin-etilésztert (pepsztatin B 40 etilésztert) kapunk. A termék antipepszin-aktivitása, ID50 = 0,054 y, bomláspontja 250—251 C°, forgatása (a)|>0 = - 90° (c = 0,5, ecetsav). Elemi összetétele: a C37 H 69 N 5 0 9 képletre számított: C 61,04% H 9,55% N 9,62% O 19,78%; 45 talált: C 61,28% H 9,49% N 9,46% O 19,65%. 8. példa 50 3,0 g 2. példában ismertetett eljárással előállított új pepsztatin-származékot melegítés közben feloldunk 100 ml abszolút n-propanolban; az oldathoz hozzáadunk 0,2 ml tömény kénsavat és az elegyet 6 órán keresztül 80 C°-on melegítve a pepsztatin-származékot észterez-55 zük. A reakcióelegyet ezután vákuumban 20 ml térfogatra bepároljuk, a kivált csapadékot szűrjük, n-propanollal mossuk és megszárítjuk. Ilyen módon 900 mg fehér port kapunk. A port 40,0 ml abszolút propanolból átkristályosítva fehér por formájában 480,0 mg pepszta-60 tin B n-propilésztert kapunk. A termék antipepszin-aktivitása, ID50 =0,073y, bomláspontja 218—220 C°, forgatása (a)g> =—89,5° (c =0,5, ecetsav). Elemi összetétele: a C38 H 70 N 5 O 9 képletre számított: C 61,50% H 9,64% N 9,43% O 19,40%; 65 talált; C 61,35% H 9,68% N 9,52% O 19,29%,
