166526. lajstromszámú szabadalom • Emberi epiteliális, heterploid májsejtvonal
166526 8 alább 50%-os glikogén-tartalom növekedést eredményez. Az ilyen biológiai vizsgálatok általában — mint ismeretes — csak elég nagy hibahatárral végezhetők, így a megadott jellemző glikogén-tartalom növekedése csak átlagként kezelhető. Hangsúlyozni kívánjuk, hogy semmiféle más ismert vagy leírt sejtvonalnak nincsen ilyen glikogéntartalma, illetve az a képessége, hogy megnövelje a glikogén-tartalmat normál, azaz szokásos közegben. Az egyéb sejtvonalakra vonatkozó eredmények azt is bizonyítják, hogy a találmány szerinti máj sejtvonal erősen különbözik minden egyéb sejtvonaltól. A sejtvonal felhasználható különböző emberi és állati vírusok tenyésztésére. Ezek közé tartoznak a DNS-vírusok, úgymint a himlő-vírus, adeno-vírus, herpesz-vírus, valamint az RNS-vírusok, mint a poliomielitisz-vírus, a HeLa sejthez adaptált echo-vírus, a parainfluenza-1 (Lendai) vírus, a macskák fertőző enteritisz-vírusa és az arbo-vírusok, mint a Semliki Forest- és a Síndbis-vírusok. A találmány szerinti sejtvonal előnyös tulajdonsága, hogy alkalmas emberi hepatitisz-vírus tenyésztésére, melyet eddig hagyományos sejt-rendszerben nem sikerült tenyészteni. Továbbá, mivel a találmány szerinti sejtvonal bármilyen normál máj sejtekből nyert rendszernél jobban hasonlít az emberi máj hepatocitáira, alkalmas arra, hogy a májjal kapcsolatos vírusokat testen kívüli „modell" rendszerben tanulmányozzuk. Ebben a vonatkozásban a sejtvonal igen fontos kutatási eszközként használható fel. Az ilyen módon nyert vírusok alkalmasak további ismert felhasználásra, mint például ugyanazon, vagy más sejtkultúrában való átoltásra, abból a célból, hogy tisztított, vagy gyengített törzset, vagy vírusvakcinát nyerjünk. A találmánynak megfelelően előállított antigén tulajdonságú vírusanyag a szokásos módszerekkel inaktiválható, inaktivált vakcinák előállítása céljából. Élő, vagy inaktivált vakcinák általában valamely farmakológiailag alkalmas hordozóval elegyítve kerülnek felhasználásra, folyékony vagy szilárd formában. A találmány szerinti sejtvonal felhasználható kutatási célra is, például a máj anyagcsere-folyamatai, a glikogén-termelés és a normális májban in vivo termelt enzimek vizsgálatára, valamint a májban termelt enzimek, például foszforiláz és bizonyos hormonok, melyek például a szénhidrát anyagcserét szabályozzák, előállításához. 1. példa 105 —10 6 sejtnek megfelelő mennyiségű WRL 68 sejtmintát kb. 25 ml-es, lapos orvosságos üvegekbe letöltött Eagle-féle minimális esszenciális táptalajra oltunk, mely 10% marhaszérumot tartalmaz. 3 napos, 37 °C-on történő tenyésztés után rögök figyelhetők meg. Ekkor 0,5 ml, kb. 104 TCLD 50 (szövetkultúra fertőző dózis)-t tartalmazó adeno-vírus-11 szuszpenzióval a tenyészetet beoltjuk fél órás inkubálással a vínist a sejtekre adszorbeáltatjuk. A fölösleges vírust „fenntartó" tápfolyadékkal (a fentivel azonos, szérum nélkül) lemossuk és a tenyészetet 37 °C-on inkubáljuk. 5 Az adeno-vírusra jellemző citopatogén hatás 3 nap alatt fejlődik ki. Ekkor a kultúrát fagyasztjuk, olvasztjuk, hogy a vírust a sejtekből kiszabadítsuk. A sejttörmeléket szűréssel eltávolítjuk, a vírus jelenlétét a tápfolyadékban „patás" majom vértestjeinek 10 hemagglutinációjával kimutatjuk. A folyadék titere 128, ami a még agglutinációt adó maximális hígítás. Adeno-vírus 4, 5, 7 és 15 törzseket ugyanilyen módon lehet tenyészteni, kielégítő titerrel. 2. példa A himlő-vírus Lister-törzsét adszorbeáltatjuk a he-20 teroploid májsejtekre az 1. példa szerint. 24 óra alatt 37 °C-on tipikus citopatogén hatás alakul ki. A sejtvonal a Jenner-himlőtörzsre is fogékony és hasonló citopatogén hatás figyelhető meg. 25 3. példa Az alábbi vírusok szintén növekednek a WRL 68 30 sejtvonalon az előző példákban vázolt módszer alkalmazása esetén: Poliomielitisz-vírus, előzetesen HeLa sejtkultúrához adaptált echo-vírus 2, 7, 9, 11, 15, 17, 20, 23 és 35 25, Sendai-vírus, herpesz-vírüs, a macska fertőző enteritisz-vírusa, SanCarlos-vírus, arbo-vírusok, mint a Semliki Forest-vírus és a Sindbis-vírus. Ezek a vírusok kielégítő antigén tulajdonsággal rendelkeznek a humán heteroploid májsejtekhez va-40 ló adaptálás után. Ilyen és egyéb alkalmas vírusok ezért az ilyen sejtvonalakon sikerrel tenyészthetők és vakcinaként alkalmazhatók valamely farmakológiailag elfogadható vivőanyaggal elegyítve, megfelelő ismert inaktiválás, vagy gyengítés után. Szabadalmi igénypont 50 Az 1. és 2. ábrákban bemutatottaknak megfelelő, patogén vírusok szaporítására alkalmas emberi epiteliális, heteroploid „Apostolov" májsetjvonal — ahol az ábrákban 55 C jelentése egyedi sejt kerek vonalakkal, N jelentése maximálisan 5 NL = nukleoluszt tartalmazó sejtmag, CP jelentése citoplazma, NL jelentése nukleolusz, 60 MB jelentése szemcse, M jelentése mitokondrium. Gl jelentése glikogén —, azzal jellemezve, hogy tápfolyadékban, amely elő-65 nyösen valamely ismert alapszérumot, szén- és ener-4 *
