166397. lajstromszámú szabadalom • Eljárás új A-287 jelű antibiotikum előállítására
166397 lékos összetételt adja: szén 44,98%; hidrogén 6,15%; nitrogén 10,28%; oxigén 26,37%; és hamu 4,15%. Az A-faktor molekulasúlya 1500-as nagyságrendűnek adódott (1475,73). A molekulasúlyt metil-alkoholban, ozmométeresmódszerrel, 115mintájú Hitachi—Perkin— 5 Elmer-féle molekulasúly-meghatározó berendezéssel határoztuk meg. Az 1. sz. ábra az A-faktor ásványi olajban felvett infravörös színképét mutatja be. Az ábrán a következő abszorpciós maximumok észlelhetők (ásványolaj sávok 10 3,42 és 3,50 mikronnál): 3,05 (közepes, 6,05 (közepes-erős), 6,59 (közepes), 6,84 (közepes) és 7,27 (közepes) mikronnál. Az A-faktor vizes oldatban felvett ultraíbolya-elnyelési színképe Xmax =200 mjji-nál (s 9, 500; lépcső) és 273 mjx-nál (s 2,700) mutat abszorpciós maximumokat. Lúgban vagy savban eltolódás nincs. Az A—287 antibiotikum B-faktor fehér színű amorf vegyület, amelynek nincs határozott olvadáspontja, amely azonban 200 C° körüli hőmérsékleten szenesedik. A B-faktor mikroelemzése a következő százalékos összetételt adja: szén 49,96%; hidrogén 6,98%; nitrogén 9,90%; oxigén 23,86% és hamu 4,66%. A B-faktor metil-alkoholban, ozmométeres módszerrel, 115 mintájú Hitachi—Perkin—Elmer-féle molekulasúly-meghatározó készülékkel meghatározott molekulasúlya megközelítőleg 2800 (2781,28). A 2. sz. ábra a B-faktor ásványi olajban felvett infravörös színképét mutatja be. A következő abszorpciós maximumokat észleljük (ásványolaj sávok 3,45 és 3,52 30 mikronnál): 3,06 (közepes), 6,09 (erős), 6,60 (közepes), 6,89 (közepes) és 7,30 (közepes) mikronnál. A B-faktor vizes oldatban felvett ultraibolya elnyelési színképe Amax = 220 mpL-nál (s 9, 200; lépcső) és 273 mjj.nál (s 3, 200) mutat abszorpciós maximumot. Lúgban 35 vagy savban eltolódás nincs. Az A—287 faktorok elektrometriás titrálásánál állandó lúgfogyasztás volt észlelhető, ami a ciklusos peptidek jellemző tulajdonsága. Az A—287 faktorok és keverékeik lényegében old- 40 hatók vízben és rövidszénláncú alacsonyabb alkoholokban, így például butil-alkoholban és metil-alkoholban. Oldhatatlanok sok szerves oldószerben, így szénhidrogénekben, például hexánban vagy heptánban, klórozott szénhidrogénekben, így kloroformban és széntetraklorid- 45 ban, észterekben, így etilacetátban és amilacetátban, aromád oldószerekben, így benzolban vagy toluolban, valamint éterekben, így dietiléterben. Az A—287 antibiotikum A- és B-faktor papírkromatográfiája során az alábbi Rf-értékeket kaptuk. A papír- 50 kromatografálásnál alkalmazott rendszereket ugyancsak az alábbiakban mutatjuk be. Kimutatás céljaira teszt mikroorganizmusként a Bacillus subtilis ATCC 6633, a Sarcina lutea ATCC 9341 vagy a Staphylococcus auerus ATCC 6538 mikroorganizmusokat használtuk. 55 60 Rf-érték A-faktor B-faktor Oldószer rendszer Rf-érték A-faktor B-faktor Oldószer rendszer 0,17 0,88 Vízzel telített butil-alkohol 0,70 0,88 Vízzel telített butil-alkohol plusz 2% p-toluolszulfonsav 0,39 0,90 Vízzel telített butil-alkohol plusz 2% p-tóluolszulfpnsav és 2% piperidin 0,72 0,68 0,86 80% etil-alkohol 1,5% NaCl-dal. A papírt 0,95 mól Na2 S0 4 és 0,05 mól NaHS04 .H 2 0 oldattal impregnáltuk. 0,89 3:1 arányú metil-alkohol-0,1 N sósav oldat. Az A—287 antibiotikum A- és B-faktorok aminosav elemzése igen hasonló eredményeket ad, az alábbi közelítő arányokkal: 15 Aminosav Közelítő arány Szerin 1 Glutaminsav 1 Glicin 2 70 Alan in 1 Valin 2 Cisztein 1 Izoleucin 1 Leucin 2 7.5 Tríptofán 1 Ismeretlen 2 Az A—287 antibiotikum és annak egyedi faktorai gátolják az állatokkal és növényekkel szemben patogén mikroorganizmusok növekedését. Az A—287 antibiotikum és egyedi faktorai emellett még élősdiölő (paraziticid) és növekedést serkentő hatással is rendelkeznek. Az antibiotikum keverék és az egyedi faktorok mind in vitro, mind pedig in vivo, különösen hatékonyak a patogén Gram-pozitív baktériumokkal szemben és jól alkalmazhatók az ezen mikroorganizmusok okozta megbetegedések kezelésében és leküzdésében. Az alábbi I. táblázatban az A—287 A-faktor és B-faktor standard agar-hígítási teszt segítségével egy sor reprezentatív mikroorganizmus esetében meghatározott legkisebb gátló koncentrációt mutatjuk be. /. táblázat 65 Legkisebb gáti ó koncentráció g/ml Mikroorganizmus A-faktor B-faktor Staphylococcus aureus 6,25 12,5 Staphylococcus albus 6,25 6,25 Bacillus subtilis 12,5 3,13 Mycobacterium avium 100,0 12,5 Proteus vulgaris 50,0 50,0 Shigella paradysenteriae 100,0 25,0 Brucella bronchiseptica 100, 12,5 Vibrio metschnikovii 50, 25,0 Erwinia amylovora 100, 100, Agrobacterium tumefaciens 100, 100, Xanthomonas malvacearum 50, 50, Xanthomonas phaseoli 25, 25, Psedomonas solanacearum 50, 6,25 Pseudomonas syringe 100, 100, Corynebacterium insidiosum 100, 100, Alternaria oleracea 25, 12,5 Ceratostomella fimbriata. 50, 50 Glomerella singulata 100, 100, Pulularia sp. 25, 12,5 Verticülium albo-atrum 100, 100, 2
