166363. lajstromszámú szabadalom • Eljárás a Bu 1975-antibiotikum-keverék és összetevői előállítására
11 166363 12 5. táblázat A Q és C2 jelű vegyületek és az ambutirozin A és B mágneses magrezonancia spektrum-adatainak összehasonlítása (60 MHz, D20-ban, pH 2,0) Kémiai A protonok száma és a jelek típusa eltolódás (8, ppm) Bu 1975 d Bu 1975 C2 Ambutirozin A Ambutirozin B 1,2—2,4 6H (többes jel) 6H (többes jel) 4H (többes jel) 4H (többes jel) 2,5—4,4 18H (többes jel) 18H (többes jel) 19H (többes jel) 19H (többes jel) 5,16 — — 1H (egyes jel) 1H (egyes jel) 5,28 1H (egyes jel) 1H (egyes jel) — — 5,98 — 1H (kettős jel, J=3,5Hz) — 1H (kettős jel, J = 3,6 Hz) 6,10 1H (kettős jel, J = 3,5Hz) — 1H (kettős jel, J = 3,6 Hz) Előállítottuk a C± jelű vegyület tetraacetátját is. Ennek olvadáspontja 250 C°-nál magasabb, optikai forgatóképessége: [<X]D'5 = +26,0° (koncentráció: 0,5%, vizes oldat). Elemanalízis: a C2 iH 41 N 5 0 11 .(C2H 2 0) 4 . 3 /2 H a O képletre : számított: C 47,40 H 7,13 N 9,53%. mért: C 47,30 H 7,47 N 9,65%. Előállítottuk a C2 vegyület dikarbonátsóját. Ez 172— 178 C° hőmérsékleten bomlás közben olvad, optikai forgatóképessége: MD = +30,0° (koncentráció: 1%, vizes oldat). Elemanalízis: a C21 H 41 N 5 0 11 .2H 2 C0 3 képletre számított: C 41,63 H 6,83 N 10,55%; mért: C 41,22 H 6,67 N 10,82%. Előállítottuk a C2 jelű vegyület tetraacetátját is. Ennek olvadáspontja 250 C°-nál magasabb, optikai forgatóképessége: MD'5 = +43° (koncentráció: 0,5%, vizes oldat). Elemanalízis: a C21 H 41 N50 U . (C 2 H 2 0) 4 . H 2 0 képletre számított: C 47,99 H 7,08 N9,65%; mért: C 48,09 H 7,20 N 9,42%. A Q és C2 jelű vegyületek csak az ultraibolya hullámhossztartományban mutatnak végabszorpciót. A Cx és C2 jelű vegyületek infravörös abszorpciós maximumai teljesen hasonlóak az ambutirozin A-éhoz és ambutirozin B-éhez. A CL mágneses magrezonancia spektrumában két anomer proton jelenléte mutatható ki, S 5,28 (egyes jel) és 6,10 (kettős jel, J = 3,5 Hz) ppmnél.az alacsonyabb erő terű jel különbözik a C2 mágneses magrezonancia spektrumának hasonló jelétől, amelyben az anomer protonok 8 5,28 (egyes jel) és 5,98 (kettős jel, J = 3,5 Hz) ppm-nél figyelhetők meg. Hasonló különbség látható a második anomer proton kémiai eltolódásában az ambutirozin A és B mágneses magrezonancia spektrumában. A C± és C2 jelű vegyületek mágneses magrezonancia spektrum-adatai összehasonlítva az ambutirozin A és B adataival az 5. táblázatban láthatók. Az 5. táblázat adataiból kiderül, hogy a protonok aránya a magasabb (8 1,2—2,4 ppm) és az alacsonyabb (8 2,5—4,4) ppm metilén-metin-területeken belül 6 : 18 a C4 és C 2 esetében, ellentétben az ambuti-20 rozin A és B esetében megfigyelt 4:19 aránnyal. A Q és C2 jelű vegyületek baktériumellenes spektrumának szemléltetésére több mikroorganizmussal szemben meghatároztuk a legkisebb növekedésgátló koncentrációkat (MIC). Az ismert kétszeres agar-hígításos 25 módszert tápagarból (Eiken) készült lemezekkel foganatosítottuk. Oltáshoz Steer-féle „multi-inoculating"berendezést használtunk. Inokulumként a vizsgálat mikroorganizmus szív-kivonatos táptalajon [Heart Infusion Broth (Difco)] egy éjszakán át nőtt 1000-szeresen 30 hígított tenyészetét használtuk. A Mycobacterium törzseket No. 1001 agartáptalajt tartalmazó lemezeken vizsgáltuk, amelynek összetétele: 3% glicerin 35 0,3% nátrium-L-glutamát 0,2% pepton 0,31% Na2 HP0 4 0,005% ammóniumcitrát 0,001% MgS04 40 1,5% agar. Az oltást egy éjszakán át nőtt, 1000-szeresre hígított tenyészettel végeztük. Az eredményeket a 6. táblázatban az összehasonlítás céljából vizsgált ambutirozin 45 A-val és a kanamicinnel kapott eredményekkel együtt adjuk meg. A Cx és C 2 jelű, azaz az I és II képletű vegyületek lényegében azonos biológiai hatékonysággal rendelkeznek. Igen sok Gram-pozitív és Gram-negatív baktérium 50 növekedését gátolják, köztük olyanokét is, amelyek ellenállók az általánosan használt aminoglükozid-típusú antibiotikumokkal, például a sztreptomicinnel, neomicinnel, kanamicinnel, gentamicinnel szemben. Általában a Cx és C 2 hatékonysága és hatásspektruma az 55 ambutirozinéhoz hasonló. AQ és C2 jelű vegyületek azonban szélesebb spektrummal rendelkeznek, mint az ambutirozin, amennyiben ezek gátolják bizonyos ambutirozin-rezisztens mikroorganizmusok növekedését és valamivel nagyobb Pseudomonas-ellenes hatással ren-60 delkeznek, mint az ambutirozin. A Cx jelű vegyület hatását a mikroorganizmusok egy kiválasztott csoportjával, köztük két érzékeny standard törzzsel (Staphilococcus aureus Smith, Escherichia coli Juhi), hat rezisztens mikroorganizmussal (Staphylo-65 coccus aureus, Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae) 6
