166347. lajstromszámú szabadalom • Eljárás rifamicin B mikrobiológiai előállítására
13 166347 14 /. példa A Streptomyces G5/A törzs spóraszuszpenziójával 100 ml, 500 ml-es Erlenmeyer-lombikban sterilezett, a követke2Ő összetételű táptalajt oltunk: 5 10 Húskivonat 5g Élesztőkivonat 5g Pepton 5g Kazein-hidrolizátum 3g Glükóz 20 g NaCl 15 g Dsztillált víz 1000 ml A táptalaj pH-ját 7,3-ra állítjuk be. A tenyészetet az oltást követően 48 órán át, 28 C° hőmérsékleten rázóasztalon rázatjuk, majd a tenyészet 10 ml-ével 100 ml, 500 ml-es, ledugózott Erlenmeyerlombikban sterilezett, a következő összetételű táptalajt oltunk: 15 20 (NH4 ) 2 S0 4 KH2 P0 4 MgS04 Ammóniummolibdenát 7H2 0 MnSO, AH2 0 CoCl, • 6 H,0 ZnSO, 7H2 0 CuS04 • 5 Ha O FeS04 • 7 H2 0 Víz 4.9 g 2g 0,85 g 0,001 g 0,004 g 0,002 g 0,05 g 0,0033 g 0.01 g 1000 ml-re. A táptalaj pH-ját sterilezés után puffernd 6,6—6,7-re állítjuk be. Az oltást követően a tenyészetet az 1. példában ismer^ tetett körülmények között tenyésztjük. A táptalaj maximális rifamicin B-tartalma eléri az 5400 fig/ml-t. A táptalaj a kromatográfiás vizsgálatok szerint a rifamicinhez hasonló más termékeket nem tartalmaz. 3. példa Glükóz 70 g Szójaliszt 5g Mogyoróliszt 20 g (NH^SO, 7g KH2 PO á 2g CaCOs 6g MgS04 • 7 H2 0 lg CuS04 • 5 H2 0 3,3 mg ZNS04 • 7 H2 0 50 mg MnS04 • 4 H2 0 4 mg FeSOé -7H 2 0 10 mg CoCl2 • 6 H2 0 2 mg Ammóniummolibdenát 1 mg Desztillált víz 1000 ml-re. A táptalaj pH-ját pufferral 7-re állítjuk be. A beoltott tenyészetet percenként 250-et forduló rázóasztalon (5 cm kitérés), 28 C° hőmérsékleten, 148—156 órán át rázatjuk. A táptalaj rifamicin B-tartalma ekkor 4000—4500 (Jig/ml. 2. példa Az 1. példában megadott eljárással elkészítjük a Streptomyces G5/A vegetatív tenyészetét. A vegetatív tenyészettel a következő összetételű főfermentációs táptalajt oltjuk: Mogyoróliszt Szójaliszt Glükóz Propilén-glikol Glicerin CaCO. 25 g 10 g 100,5 g 5g 40g 9,5 g 25 30 35 40 45 50 55 A Streptomyces G5/A mikroorganizmust az 1. példában megadott körülmények között tenyésztjük, azzal a különbséggel, hogy 500 ml, 2000 ml-es lombikban sterilezett táptalajt oltunk. 48 órán át tartó tenyésztés után három ilyen tenyészettel 90 liter, az előzőekben megadott összetételű, saválló acél fermentorban sterilezett táptalajt oltunk. Az inokulálást 28 C° hőmérsékleten végezzük, a keverő fordulatszáma percenként 500, az átáramoltatott levegő térfogata percenként 90 liter. 36 órán át tartó tenyésztés után a micéliumos növekedés eléri a 7%-ot. Ezzel a második vegetatív tenyészettel 1300 liter térfogatú saválló acél fermentorban 900 liter, a 2. példában megadott összetételű főfermentációs táptalajt oltunk. A tenyésztést 28 C° hőmérsékleten végezzük, a keverő fordulatszáma percenként 170, az átáramoltatott levegő térfogata percenként 900 liter, túlnyomás 0,2 atü. A tenyésztés 150. órájában a táptalaj a spektrofotometriás vizsgálatok szerinti milliliterenként 5200/5500 (xg hatóanyagot tartalmaz. A kromatográfiás vizsgálatok szerint a hatóanyag gyakorlatilag teljes mértékben rifamicin B. Szabadalmi igénypont Eljárás gyakorlatilag tiszta, rokonvegyületektől mentes rifamicin B előállítására, azzal jellemezve, hogy egy jó termelőképességű mutáns törzset, a Streptomyces CBS 328.73 törzset felhasználható szénforrást és nitrogénforrást, továbbá szervetlen sókat tartalmazó pufferezett táptalajon, süllyesztett, levegőztetett fermentációs körülmények között tenyésztjük, előnyösen 40 és 200 óra közötti ideig, majd a keletkezett rifamicin B-t önmagában ismert módon elválasztjuk. A kiadásért felel: a Közgazdasági és Jogi Könyvkiadó igazgatója 76.2746.66-42 Alföldi Nyomda, Debrecen — Felelős vezető: Benkő István igazgató
