166209. lajstromszámú szabadalom • Eljárás 7-amino-CEF-3-EM-4-karbonsav előállítására
166209 Az eljáráshoz használható cefalosporin C származékokra példa a cefalosporin C, cefalosporin C kinolin sója, cefalosporin C trietanol-amin sója, N-klór-acetil-cefalosporin C, N-acetil-cefalosporin C, N-propionilcefalosporin C, N-propionil-cefalosporin C kinolinsója, cefalosporin C dinátriumsója, N-terc-butiloxikarbonfl-cefalosporin C dikáliumsója, cefalosporin C cinksója és hasonló cefalosporin C sók és N-védett 5 származékaik. A találmány szerinti tökéletesített eljárással készített 7-amino-cefalosporánsav mentes a penicillinszennyezésektől és ezért acilézéssel olyan kívánt 7-acil-amino-cefalosporánsav antibiotikumot nyerünk, mely acil-amino-penicillánsavtól mentes. Mint említettük, a leírt tökéletesített oldallánc-lehasítási eljárás abból áll, hogy a vegyes anhidrid-képzés 10 lépésében a tercier amint a már felsorolt amidok egyikével helyettesítjük. A helyettesítés nem várt eredményét, a 7-amino-cefalosporánsav hasítási termék penicillin-szennyeződésének kiküszöbölését az alábbi táblázatokban mutatjuk be. A táblázatok jobb szélső oszlopában közölt penicillin-próbákat a következőképpen végeztük: A közölt reagensek és oldószerek alkalmazásával nyert hasítási terméket, a 7-amino-cefalosporánsavat 15 tiofén-2-acetil-kloriddal ismert eljárások szerint acilezzűk 7-{2'-tienil-acetamido)-penicülánsav — mely utóbbi a 7-amino-cefalosporánsav hasítási termék 6-amino-penicillánsav szennyezéséből ered — előállítása céljából. Az acilezett terméket vízben feloldottuk és az oldat pH-ját kb. 2-re állítottuk be. Az acilezett cefalosporin termék és az acilezett penicillin csapadékot képez, melyet diizopropil-éterrel extraháltunk. Az 20 extraktumot eredeti térfogatának kb. 1/4-ére töményítettük be és a tömény oldatot papíron kromatografáltuk, vízzel telített etilétert használva a kifejlesztéshez. A kifejlesztett kromatogramok anyagával ezután bioautográfiát végeztünk penicillinérzékeny organizmus felhasználásával. A közölt eredményeket Bacillus subtüissel kaptuk, ezen organizmusok penicillinérzékenysége ismert. Az acilezett penicillánsavnak tulajdonítható növekedés-gátlási zónákat kontroll bioautogramokhoz viszonyítva mértük le. A bioautográfiás 25 zónák méretét összehasonlítottuk ismert mennyiségű 6-{2-tienil-acet-amido)-cefalosporánsav minták hasonló zónáival. A fent leírt vizsgálati módszer megbízhatóan mutat ki még 0,4—0,5 ppm penicillin-aktivitást is. Az alábbi I. táblázatban közöljük az eredményeket, melyeket a hasítási reakció vegyes anhidrid-képző lépésében a tercier aminnak dimetil-acet-amiddal való helyettesítésével kaptunk. Minden esetben 20 30 milimóí cefalosporin C-t, védett amino-csoportu cefalosporin C-t vagy cefalosporin C sót alkalmaztunk. Minden alkalommal acetil-klorid volt a vegyes anhidrid-képző reagens és a feltüntetett oldószerből 50 ml-t alkalmaztunk. /. táblázat Dimetil-acet-amiddal képzett cefalosporin C-ecetsav vegyes anhidrid 35 40 45 50 55 1/ A = = N-propionil-cefalosporin C kinolin só 2/ Nem kimutatható gátlási zóna 60 * B = N-klór-acetil-cefalosporin C kinolinsó .H2 0 4/ C = cefalosporin C cinksó 51 Oldószertérfogat 152 ml Kiindulási DMAC Penicillinanyag Oldószer térfogat (ml) próba A1 CHCI3 11 N.K.Z.2 B3 CHCI3 8,8 (94 mM) N.K.Z. B CHCI3 8,8 N.K.Z. A CH2CL2 8.8 N.K.Z. A CHCI3 13,2 N.K.Z. A CHCI3 8 N.K.Z. A CH3 CH 2 CN 8,8 (94 mM) N.K.Z. A CHCI3 8,8 N.K.Z. C4 CHCI3 10,3(111 mM) N.K.Z. A CH3 CH,CN S 17,6 (188 mM) N.K.Z. A CHCI3 8,7 N.K.Z. A nC3 H 7 CN 8,8 N.K.Z. 65 A következő II. táblázatban feltüntetett eredményekhez úgy jutottunk, hogy a vegyes anhidrid-képző lépésben a tercier amint dimetil-formamiddal (DMF) helyettesítettük. Minden esetben kloroformot használtunk oldószerként.
