166145. lajstromszámú szabadalom • Eljárás stabil kataláz enzimkészitmény előállítására

MAGYAR NÉPKÖZTÁRSASÁG ORSZÁGOS TALÁLMÁNYI HIVATAL SZABADALMI LEÍRÁS SZOLGALATI TALÄLMÄNY Bejelentés napja: 1973. V. 29. (-) Közzététel napja: 1974. VII. 27. Megjelent: 1976. IX. 30. (RE-537) 166145 Nemzetközi osztályozás: C 07 g 7/02 Feltalálók: BOKOS Gyula vegyésztechnikus, 30%, CSÓKA Árpád oki.vegyészmérnök, 30%, dr. GÁNTI Tibor oki. vegyészmérnök, 30%, dr. PÁLMAI György oki. vegyészmérnök, 10%, Budapest Tulajdonos: REANAL Finomvegyszergyár, Budapest Eljárás stabil kataláz enzimkészítmény előállítására A találmány tárgya eljárás főleg élelmiszeripari felhasználásra alkalmas, nagy aktivitású kristályos kataláz, valamint ebből készült szuszpenzió és szűréssel sterilizálható stabil oldat előállítására. Kataláz készítményeket iparilag az élelmiszer- 5 ipari termékekben keletkező vagy oda mesterségesen bevitt hidrogénperoxidok elbontására használnak. A borok glükózoxidázos kezelésénél keletkező hidrogénperoxidból eredő ízváltozás kiküszöbölhető kataláz adagolásával. Különösen sok 10 katalázt használ fel a sajtipar, a feldolgozandó tej hidrogénperoxiddal történő sterilezése után visszamaradó peroxidok elbontására. Élelmiszeripari felhasználás céljára alkalmas 15 kataláz készítmény előállítására több eljárás ismeretes. Ezek a kataláz tartalmú enzimet emlős májból, célszerűen lómájból vagy marhamájból -nyerik ki. Az extrakció az esetek többségében vízzel történik, de ismeretesek eljárások, amelyben 20 extraháló szerként vizes acetont (2 703 779 ljsz. amerikai szabadalom), illetve vizes maláta-amilóz oldatot (1 406 695 ljsz. francia szabadalom) alkalmaznak extrahálószerként. Az extrakciót a máj darálása, illetve homogenizálása, egyes esetekben 25 autolízise [M. Shirakawa: J. Fac. Agr. Kyushu Univ. 10, 69—78 (1951)], hidegen való tárolása (1 406 695 ljsz. francia szabadalom) vagy szárazjeges kezelése (2 834 713 ljsz. amerikai szabadalom) előzi meg. Az extrakció az esetek többségében 30 szobahőfokon történik, néhány eljárás 0 °C-on, illetve -f-4 °C-on történő extrakciót ír elő. Az extraktum anyagaiból a kataláz enzimet általában oldószeres frakcionálással különítik el. Oldószerként többnyire acetont alkalmaznak: [V. Kennedy: Boichem. Biophys. Acta. 10, 486 (1953)]; H. Fukuda: Miyazaki Daigaku Nogakubu Kenkyn Jiko 3, 84 (1958); 2 703 799 ljsz. amerikai szabadalom, H. Tauber és E. L. Petit: J. Biol. Chem. 195, 703 (1952); 200 738 ljsz. szovjet szabadalom), de alkalmazható etanol [G. Schnuchel: Hoppe-Seyler's Zeitschr. für physiol. Chem. 298, 241 (1954); 2 834 713 ljsz. amerikai szabadalom, dioxán (1406 695 ljsz. francia szabadalom), kloroformetanol elegy (W. Horimann: Arch. Biochem. Biophys. 33, 478 (1951); G. Ceriotti, L. Spandrio: Giorsz. Biochim 5, 349 (1956)] is. A tisztítások utolsó lépéseiben a kataláz enzim kristályosodása általában spontán megindul, ha az enzimtartalmú oldat pH-ját megfelelő pufferrel az izoelektromos pontra állítják be. A kristályosítás elősegítésére időszakos kevertetést (2 834 713 ljsz. amerikai szabadalom) illetve dialízist [H. Tauber: J. Biol. Chem. 195, 703 (1952)] alkalmaznak. A tisztított katalázt az 1 406 695 ljsz. francia szabadalom szerint liofilizálják, vagy elterjedtebben oldatként hozzák forgalomba. Az oldat stabilizálására timolt, etiléndiamin-tetraacetát Na-sóját (1 489 707 ljsz. francia szabadalom), glicerin-alko-183145