166074. lajstromszámú szabadalom • Eljárás hordozóhoz kötött biológiailag aktív proteinek előállítására

166074 9 10 amiddäl és 0,1 g N.N'-metilén-'bisz-akrilamiddal elegyítjük. Az eluátumban az eredeti enzim-aktivitás 10%-át mutattuk 'ki. 10 A liofilizált termék aktivitása: 210 egység/g. 5. példa: 15 Kiindulási anyagok: Urikáz 4,5 egység/mg, 50%-os glicerinben, 0,05 mólos glicinben és 0,13 mólos nátriumkarbonátban oldva, 20 akrilaimid, akrilsav-(2,3-epoxipropilészter), N,N'Hmetilén-bisz-(akriilamid, 3-dimetilamino-propionitril, 25 amimómumperoxidiszulfát. Módszer: 10 mg urikázt 1 liter 0,01 mólos, 10 pH^értékű 30 glicin-pufferrel szemben, 4 C°-on mintegy 4 órán át diaiizálunk. A dializátumot 1 ml 1 'mólos 8,0 pHnértékű trietanoliamin-pufferrel elegyítjük, majd 10 C°-on, nitrogénatmoszférában 0,1 ml akrilsav-(2,3-epoxipropilészter) jelenlétében in- 35 kubaijuk és 30 percig keverjük. A további feldolgozást az 1. példában leírtak szerint végezzük. A liofilizált termék aktivitása: 3,5 egység/g. 6. példa: Kiindulási anyagok: Hexokináz, 140 egység/mg, 45 akrilamid, akrilsav-(2,3-epoxipropilészter), N,N'-metilén-bisz-akrilaimid, 3-dimetilamino-propionitril, aimmóniumperoxidiszulfát. 50 Módszer: 20 img hexokináznkristály szuszpenziót feloldunk 5 ml vízben és 1 liter 0,01 mólos 8,0 pH- 55 értékű trietanolamin-pufferrel szemben dializáljuk 4 C°-on. Akrilsav-(2,3-epoxipropilészter) jelenlétében nitrogénatmoszférában 10 C°-on inkubáljuk és 30 perc múlva 10 C°-na hűtjük. Az enzimoldatot 20 ml desztillált vízben oldott 60 3 g akrilamiddal és 0,1 g N,N'-metilén-bisz-akrilamiddal elegyítjük. A további feldolgozást az 1. példa szerint végezzük. A liofilizált termék aktivitása: 12 egység/g. 65 7. példa: Kiindulási anyagok: Glükóz-oxidáz, (GOD, 220 egység/mg), 1,2-epoxi-butén-3,4, akrilamid, N,N'-metilén-bisz-akrilamid, 3-dimetilamino-propionitril, lammóniumperoxidiszulfát. Módszer: 100 mg GOD-t 2 ml, 0,5 mólos 8,0 pH-értékű trietenolamin-'pufferben oldunk nitrogénatmoszférában, 30 C°-on és 0,05 ml l,2^epoxi-butén-3,4-el inkubáljuk 30 percen át. Ezután 10 C°ra hűtjük ós 18 ml kétszer desztillált vízben oldott 3 g akrilamiddal és 0,125 g N,N'-metilénr-bisziatkriiamiddal elegyítjük. A további feldolgozást az 1. példa szerint végezzük. Az eluátumban az eredeti enzim-aktivitás 37 %-át mutattuk ki. A liofilizált termék aktivitása: 540 egység/g volt. 8. példa: Glükóz-oxidáz, 220 egység/mg, akrilsav-epoxipropilészter, akrilamid, NjN'-metilén-bisz-akrilamid, 3-dimetilamino-propionitril, ammóniumperoxidiszulfát, diaHzis-tömlö (Kalle-celofán). Módszer: 100 mg glükóz-oxidázt 2 ml, 0,5 mólos, 8,0 pH^értékű trietanolamin-pufferben oldunk nitrogénatmoszférában 30 C°-on és 0,25 ml akrilsav-(2,3-epoxi-propilészter)-<rel inkubáljuk 30 percen át. Ezután a reakciókeveréket dialízistömlőbe visszük át és egyenként 1000 ml 0,05 mólos trietanolamin-pufferrel szemben (pH = = 8,0) kétszer dializáljuk. Az előinkubált 10 mi térfogatú enzimoldatot 10 C°-ca 'hűtjük, a térfogatát kétszer desztillált vízzel 20 ml-re töltjük fel és 3 g lakrilamiddal és 0,15 g N,N-metilén-biszHakrilamid'dal összekeverjük. Nitrogénáram bevezetése után az 1. példában leírtak szerint dolgozzuk fel a terméket. Az eluátumban az eredeti enzim-aktivitás 5%-át találtuk. A liofilizált termék aktivitása: 305 egység/g volt. 9. példa: Kiindulási anyiagok: 100 mg inzulin-R, akrilamid, afcrilsav-2,3-epoxipropilészter, N,N'-metilén-bisz^akriliamid, Ezután az 1. példában ismertetett módon, nitrogénatmoszférában hozzáadjuk az initiator- 5 oldatot és a kapott terméket az 1. példa szerint feldolgozzuk. 15 35 55 60 5